摘要：为从分子水平上揭示PCS基因在番茄重金属螯合解毒过程中的作用机制，该研究以番茄（Lycopersicon esculentum Mill．）品种苏红2003幼苗eDNA为模板，根据NCBI上登录的其他植物的植物络合素合酶基因保守区设计简并引物，利用RT—PCR和RACE技术，克隆番茄植物络合素合酶基因cDNA全长，进一步利用半定量RT—PCR，探讨不同重金属处理后该基因在番茄不同器官中的表达情况。结果显示：番茄植物络合素合酶基因（LePCSl）的eDNA序列长度为1878bp，5’非编码区长113bp，3’非编码区长256bp。推导该基因编码503个氨基酸组成的蛋白，其相对分子质量为55600，等电点6．66。NCBI蛋白质比对结果显示：LePCS1由2个典型的植物络合素亚家族结构域组成，并具有19个可与金属离子结合的半胱氨酸（Cys）残基位点，其中包括4个相邻的Cys—Cys元件（90～91位、350～351位、368～369位和416～417位氨基酸）和11个单一Cys残基（56位、109位、113位、138位、144位、231位、332位、393位、396位、424位和489位氨基酸）。进化树分析表明，LePCS1与马铃薯、烟草、粉蓝烟草等茄科植物的PCS蛋白处于系统发生树的同一分支，且与马铃薯StPCS1蛋白的同源性最高（98．01％）。用含有不同浓度CdCl2·2．5H2O或CuSO4·5H2O的1／2Hoagland营养液[pH（5．8＋0．1）]处理番茄幼苗12h，结果表明：随着CdCI2·2．5H2O浓度的提高，LePCS1基因表达量迅速上升，且其在根中的表达量高于叶片，但CuSO4·5H2O对其表达并无明显促进作用。因此认为LePCS1为番茄植物络合素合酶基因，其表达受Cd^2＋诱导而上升，但不受Cu^2＋影响，并且该基因在根中的表达量高于叶片。

摘要：为减小疏果环节繁重的用工压力、提升果园作业效率和降低用工成本,该文基于自主研发的三节臂机载式疏花机,在"Y"字棚架形翠冠梨园中进行了疏花试验研究。以达到50%的花蕾保留率为疏花目标,结合疏花绳击打力度测试,确定了疏花轴在0.44 m/s行进速度下的最佳作业转速:254 r/min。疏花机田间性能试验中,研究疏花机疏花与人工定果、手持式疏花器疏花与人工定果、人工疏花与定果3种作业方式相比于只人工疏果作业方式,对花蕾保留率、坐果率、作业效率、果实产量及品质的影响。试验结果表明:机械疏花与人工疏花在作业质量上无明显差异,但疏花机作业稳定性较其他作业方式高;疏花机可降低梨树的绝对坐果率,虽然对幼果坐果量有一定的影响,但是经过定果环节后并不影响后期果实的产量及品质;疏花机的疏花效率在所有试验组中最高,相比于单一的人工疏果方式可节约66.17%的时间,适合机械化梨园大规模作业;手持式疏花器的作业效率仅次于疏花机,相比于单一的人工疏果方式作业时间可节约37.26%,适用于中小规模梨园。该试验研究有利于提高疏花机作业质量,为梨园机械化管理提供参考。

摘要：为研究早熟砂梨品种翠冠和西子绿果实黑皮病抗性差异与采后果皮生理变化的关系。在低温(2℃)贮藏条件下比较黑皮病发病情况、α-法尼烯、共轭三烯、超氧阴离子(O.2-)、过氧化氢(H2O2)以及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)、过氧化氢酶(CAT)等果皮生理指标的变化。结果表明:贮藏于低温条件下的翠冠果实,14 d出现明显的黑皮病症状,42 d病情指数达到了66.3;而西子绿果实无黑皮病症状出现。低温贮藏期间,翠冠果皮中α-法尼烯和共轭三烯含量、共轭三烯的增加速度、O.2-生成速率和H2O2含量均明显高于西子绿。翠冠和西子绿果皮抗氧化酶SOD、POD、APX和CAT的活性变化规律相同,但变化幅度存在差异。2品种SOD、POD和APX活性都在贮藏14 d时达到峰值,随后开始下降;在此过程中,2品种SOD活性相近,POD和APX活性差异逐渐减少。同时2品种CAT活性贮藏14 d后持续下降,翠冠CAT活性低于西子绿,且下降速度远远快于后者。早熟砂梨不同黑皮病敏感性品种果皮中O2.-的生成速率和H2O2含量、POD和CAT活性存在显著差异,而α-法尼烯和共轭三烯含量、共轭三烯的氧化速度是决定果实黑皮病发生与否的关键因素。

摘要：以梨黑皮病易感品种翠冠果实为材料,采用RACE技术克隆α法尼烯合成酶基因(PpAFS)的cDNA全长。PpAFS开放阅读框包括1731个碱基,编码576个氨基酸,相对分子质量为66.26×103。由该基因推测的氨基酸序列具有倍半萜类氨基酸的特征结构:RR(X8)W模式(33～43位氨基酸)和DDxxD模式(326～330位氨基酸)。2℃低温贮藏和1MCP(1甲基环丙烯)处理均能抑制翠冠果皮中PpAFS的表达,减缓α法尼烯合成,降低α法尼烯及其氧化产物共轭三烯的含量,进而推迟黑皮病的发病时间并降低其发病率;在两种措施同时应用情况下,翠冠果实采后42d之内不会发生黑皮病。贮藏于室温(28～32℃)或低温(2℃)的翠冠果实,果皮中共轭三烯含量超过***-2,黑皮病就会发生,因此推断该值为黑皮病发生的阈值,环境温度只能起延缓或加速达到这一阈值的作用,而与黑皮病的发生并无直接关系。

摘要：为建立梨轮纹病原菌和炭疽病病原菌的分子检测方法,根据GenBank上炭疽病原菌和轮纹病原菌不同种的ITS序列差异设计2对引物TJ1/TJ2和LW1/LW2,对2种病原菌菌株进行扩增,比较了常规PCR和巢式PCR的检测灵敏度,并对果园中接种梨轮纹病原菌的梨果实进行检测。结果表明,建立的PCR体系可分别从炭疽病原菌和轮纹病原菌菌株扩增出317 bp和325 bp的特异性条带,对其他相似或相近的病原真菌则无扩增条带。巢式PCR技术的灵敏度比常规PCR提高了约105倍,且可以在接种较低浓度(1 ml 10个)轮纹病原菌孢子液7 d后的梨果实组织中检测到病原菌。说明使用巢式PCR技术,可以准确、灵敏地监测梨轮纹病原菌在果园的种群消长动态。

摘要：以梨砧木豆梨(Pyrus calleryana Dcne.)为试材,克隆其植物络合素合酶基因(PcPCS1)的cDNA全长序列,并研究该基因的表达特点。结果表明PcPCS1 cDNA序列长度为1970bp,编码497个氨基酸,推导的氨基酸序列由两个典型的植物络合素亚家族结构域组成,具有3个相邻的Cys-Cys元件(331-332、351-352和369-370位氨基酸)和植物络合素合酶蛋白的特征位点(Cys-56、Cys-90/91和Cys-109)。它与豆科植物的PCS1蛋白处于系统发生树的同一分支,且与百脉根LjPCS1蛋白的同源性最高(84%)。荧光定量RT-PCR分析结果显示:PcPCS1基因为组成型表达,各器官表达量存在差异,在20μmol·L-1CdSO4胁迫条件下,其表达量迅速上升,并且在豆梨叶中的表达量高于根;不同重金属离子对其上调表达的诱导能力为Cd2+>Zn2+>Cu2+。200μmol·L-1γ–谷氨酰半胱氨酸合成酶抑制剂丁胱亚磺酰亚胺能够显著抑制该基因的表达,补充200μmol·L-1谷胱甘肽后,其相对表达量恢复或超过单一重金属离子处理的表达水平,即豆梨植物络合素以谷胱甘肽为底物,通过γ–谷氨酰半胱氨酸合成酶途经合成。

摘要：为从分子水平上揭示EG基因在早熟砂梨软化过程中的作用机制,该研究以早熟砂梨品种翠冠果肉cDNA为模板,根据NCBI上登录的其他植物内切-β-1,4-葡聚糖酶(Endo-1,4-β-glucanas,EGases)基因编码区设计引物,利用RT-PCR技术,克隆内切-β-1,4-葡聚糖酶基因家族中的2个成员PpEG1和PpEG2的编码区序列,并在此基础上,利用半定量RT-PCR技术,探讨两基因在夏季货架期1-MCP处理条件下翠冠果肉软化过程中的表达情况。结果表明:PpEG1编码区包含1 869个核苷酸,编码1个由622位氨基酸组成的多肽,PpEG2编码区包含1 863个核苷酸,编码1个由620位氨基酸组成的多肽;PpEG1和PpEG2都含有糖基水解酶家族-9(Glycosyl-hydrolases-family-9)活性位点,但PpEG2比PpEG1的C端多1个碳水化合物结合组件(Carbohydrate-binding module,CBM);PpEG1与PpEG2分别位于分子进化树的2个不同发育分枝上;在室温货架期间,翠冠果肉中PpEG1的表达量先上升,贮藏4 d时其表达量最高,后缓慢下降,而PpEG2的表达量开始缓慢上升,在贮藏12 d时出现mRNA的积累高峰;1-MCP对PpEG1和PpEG2的表达不起延缓或促进作用。PpEG1与PpEG2在翠冠果实软化过程中的不同表达规律显示,PpEG1与PpEG2作用于不同的β-1,4-葡聚糖多聚分子底物,且PpEG1和PpEG2的表达均不受乙烯调控。

摘要：木葡聚糖内糖基转移酶（XTH）通过降解细胞壁中半纤维的主要成分木葡聚糖在果实的软化过程中发挥重要作用。为探明XTH基因与砂梨品种翠冠果实软化之间的关系，本研究以翠冠果肉cDNA为模板，采用***和RACE方法，克隆获得了编码砂梨XTH基因的全cDNA序列（PpXTH1，1300bp）。序列分析表明，PpXTH1的5’端和3’端非翻译区分别为125bp和293bp，它的开放阅读框为882bp，编码294个氨基酸，推导的PpXTHl蛋白序列含有XTH蛋白的催化活性部位DEIDFEFL。砂梨PpXTH1与其他植物果实中的XTH蛋白具有较高的同源性，其中与苹果MdXTH1的同源性为98．0％；与猕猴桃AdXTH5的同源性为85．0％；与番茄LeXTH4的同源性为67．6％。分子进化树分析表明，PpXTHX与MdXTHl、PeXTHl、AdXTH5、PtrXTH16A同分在一组，而这些XTH蛋白与果实成熟和细胞壁的次生结构代谢密切相关。在夏季货架期，28～32℃条件下，翠冠果肉中PpXTHI的表达量持续上升，贮藏8d时其表达量最高，之后缓慢下降，1-MCP对PpXTH1的表达起延缓作用。以上结果说明本研究所克隆的基因为砂梨XTH基因家族成员，在贮藏软化过程中它的表达受乙烯调节。

摘要：以黄冠梨的茎段为外植体,探讨3种基本培养基(MS、AS、1/2MS)及6-BA、NAA、GA3用量对黄冠梨组织苗增殖的影响。试验结果表明:对黄冠梨组培苗增殖率的影响由大到小依次为6-BA>NAA>GA3>基本培养基;最佳的增殖培养基为MS+6-BA2.0 mg/L+NAA 0.2mg/L+GA30.1 mg/L,黄冠梨组培苗增殖系数可达5.1。

摘要：对翠冠梨分别进行1次套袋(仅在花后35 d套1次大袋)和2次套袋(花后20 d先套1次小袋,花后45 d再套1次大袋),研究其对果实品质、农药残留以及常温贮藏的影响。结果表明:果实2次套袋比1次套袋果锈少、果点不明显、果皮光洁亮丽,而且糖度较高、酸度较低;两次套袋果实的农药残留明显少于1次套袋;在常温贮藏条件下,2次套袋的果实失水率和腐烂率都比1次套袋低,果实硬度则无明显差异。可见,2次套袋比1次套袋更有利于生产优质高档果品。