摘要：根据桑(Morus bombycis)泛素基因编码区的序列(DQ839402.)设计特异引物,用RT-PCR方法克隆桑泛素基因的编码区.序列分析表明,该编码区长240 bp,编码79个氨基酸,软件分析推测编码蛋白的相对分子量和等电点分别为8.74 kD和7.16.通过同源建模获得了桑泛素基因编码蛋白的理论三维结构.将桑泛素基因与pET-32a(+)连接,构建原核表达载体pET-32a-ub,经IPTG诱导,在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效表达,并经western bolt印迹证明实现了原核表达,为进一步研究其作用机理奠定基础.

摘要：设计一对简并引物,应用RT-PCR技术,从松褐天牛细胞中克隆泛素基因的编码区,GenBank登录号EU433567。序列分析表明:该编码区的长度为228bp,编码76个氨基酸,编码蛋白的相对分子质量为8.49ku,理论等电点为5.83。同源性比较发现,松褐天牛泛素基因与其他10种昆虫泛素基因在氨基酸水平上具有94%～98%的相似性。基于核苷酸水平上的系统发育树显示松褐天牛与斜纹夜蛾、草地贪夜蛾遗传距离较近;通过同源建模获得了松褐天牛泛素基因编码蛋白的理论三维结构。将泛素基因与pET-32a(+)连接,构建原核表达载体pET-32a-ub,经IPTG诱导,松褐天牛泛素基因在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,并经Westernblotting分析验证该表达,为研究泛素在松褐天牛体内的功能奠定基础。