摘要：目的 设计适应当前临床实验室医学发展需要的新一代实验室信息系统框架。方法 以最新微服务结构理念和技术,结合国家区域医院实验室互联互通要求,全流程标准化管理以及人工智能应用等新需求,设计新一代实验室信息系统框架。结果 充分满足区域中心实验室医学未来发展需要。结论 基于微服务结构信息系统框架可以满足区域中心实验室发展的需要,其过程是一个逐渐迭代发展的过程。

摘要：目的研究用多重PCR的方法鉴定产气荚膜梭菌及分型毒素,为开展基因诊断做好准备。方法根据GenBank已经发表的产气荚膜梭菌毒素基因序列,设计出针对CPα、CPβ、CPE毒素基因的3对特异引物,运用多重PCR的方法鉴定出产气荚膜梭菌并对其毒素基因进行分型。结果经电泳鉴定,多重PCR成功的扩增出预先设计的3条特异的目的条带。结论所设计的多重PCR反应体系能够得到产气荚膜梭菌的特异序列,同时能够鉴定分型3种对人致病的毒素序列,为进一步开展基因诊断打下基础。

摘要：目的研究运用分子信标探针荧光芯片检测结核杆菌的一种新方法并优化杂交条件。方法设计出针对结核杆菌检测的特异性分子信标探针并运用于荧光芯片,提高杂交效率部分优化包括分子信标探针浓度及纯度;杂交温度、杂交时间、杂交液配方;4种分子对分子信标荧光信号比较。结果Mg2+终浓度为5 mmol/L时,PCR扩增效率最高,分子信标荧光强度最强;单侧延长臂分子信标采用淬灭分子中间标记,能很好的结合在芯片上;3种杂交液的杂交结果比较:0.15%SDS效果好于0.2%SDS,10×SSC效果好于5×SSC;Cy3-BDH分子信标探针浓度约15μmol/L、FAM-DABCLYE探针浓度约9μmol/L时,杂交反应达到7 h可检测到较强信号;Cy3-BDH组成分子信标荧光-淬灭效率较Cy3-DABCLYE高。结论单侧延长臂分子信标探针设计较巧妙地把分子信标高特异性、高敏感性的优势自然运用到芯片技术上,结核杆菌分子信标荧光芯片检测具有良好的检出率、特异性与敏感性。

摘要：目的　尝试用简并引物扩增序列未知的channelcatfish基因组DNA中rag1基因的片段并测序 ,为rag1基因的早期进化模式和遗传学变异情况的研究提供直接的证据。方法　基于rag1基因的高度保守设计简并引物 ,PCR扩增channelcatfish基因组DNA中rag1基因的片段 ,TA克隆并双向测序。将所得序列资料拼接 ,用多种生物信息学方法分析其ORF、内含子、与其它物种rag1基因及Rag1蛋白的相似性 ,并做多序列比较和系统进化树分析。结果　扩增出 3条chan nelcatfishrag1基因的DNA片段。从拼接后的序列中找到一 2 2 3 5bp的ORF和一 2 93bp的内含子 ,所得序列与其它物种rag1基因的相似程度高 (多大于 70 %) ,去除内含子后的channelcatfishrag1基因序列与zebrafish、rainbowtrout、bullshark的rag1基因cDNA全序列碱基一致的位点占 43 9%,自第 13 5 2位碱基至 2 92 5位碱基为 5 3 1%,而自第 1位碱基至 13 5 1位碱基为 3 3 2 %,有非常显著的差异 (P <0 .0 1)。结论　用简并引物成功扩增出channelcatfishrag1基因的DNA片段。序列在GenBank中的登记号是 :AY42 3 85 8(去除内含子序列 ) ,AY42 3 85 9。rag1基因进化缓慢 ,高度保守 ,不同物种rag1基因的变异相对集中在氨基末端的区域。系统进化树分析显示了 13种硬骨鱼在进化上关?

摘要：目的选择耐链霉素(STR)结核分枝杆菌rpsL基因主要突变位点密码子43序列设计分子信标探针及扩增体系,并建立运用荧光显微镜及图像分析软件检测荧光结果及定性判断的方法。方法运用软件Beacon designer设计43Codon分子信标探针及建立其扩增体系,采用荧光显微镜观测反应后的荧光信号及图像分析软件定性判断结果。结果包含43Codon rpsL基因聚合酶链反应(PCR)扩增产物条带清晰;通过荧光显微镜观测到标准株及耐STR株PCR产物与分子信标探针杂交后荧光信号区别明显;67株耐STR与10株H37RV标准株对照组荧光信号强度比较,P<0.05和P<0.01的耐STR组检出率为80%。结论分子信标技术是一种具有高灵敏、高特异核酸检测技术;采用荧光显微镜观测荧光信号具有更强的荧光信号识别、放大功能及结果判断更准确等优点。

摘要：设计并合成了核因子NF—κB的特异结合DNA序列探针，在其5’端巯基化修饰后固定在基频10MHz的石英晶体金膜表面，构建压电DNA-蛋白质相互作用生物传感器，研究了传感器的响应特性及NF-κB的p65蛋白亚基与其特异DNA结合的亲和常数Ka。DNA探针浓度在0．25—2．0μmol／L范围内，随着探针浓度的增加，传感器的响应频率逐渐增大，当探针浓度超过2．0μmol／L时，传感器的响应频率反而降低；反应缓冲液镁离子浓度、pH对p65蛋白亚基与其特异DNA结合有影响，当MgCl2浓度为50mmol／L、pH7．5时，p65蛋白亚基与其特异DNA结合引起的传感器响应频率最大；在p65质量浓度为10—40mg／L时，结合反应引起的频率变化与p65质量浓度呈线性相关，检测批内相对标准偏差（RSD）小于5％，批间RSD小于10％，最大结合量和结合常数Ka分别为（49．6±1．5）ng和（3．92±0．14）×10^6L·mol^-1。构建的压电DNA-蛋白质相互作用生物传感器具有结构简单、操作方便、不需标记、实时检测等优点，可直接用于核因子NF—κB与DNA的相互作用研究。

摘要：目的　探讨盐离子浓度对压电传感器基因杂交动力学的影响。方法　设计并合成金黄色葡萄球菌耐药基因探针及与其完全互补的靶序列 ,在石英谐振压电传感器阵列上进行杂交 ,杂交缓冲液中含 5种NaCl浓度。计算机采集并分析传感器频率数据得出杂交动力学参数 ,同时比较各盐离子浓度下杂交达到平衡所需时间 ,杂交前后的频率差 ,平衡后频率波动幅度大小。结果　随NaCl浓度增加 ,结合速率常数、杂交平衡常数、最大杂交量均呈现明显增大趋势 ,而离解速率常数呈下降趋势 ,杂交前与杂交平衡后的频率差值增大 ,同时 ,杂交平衡后频率波动幅度相应增大 ,杂交达平衡所需时间延长。结论　一定的盐离子浓度促进基因杂交 。

摘要：目的建立了一种基于颜色判定的,能够快速准确地检测铜绿假单胞菌的LAMP方法。方法针对铜绿假单胞菌OprL基因设计3对LAMP引物,通过引物特异性识别OprL的8个独立区域来快速检测铜绿假单胞菌。如果在反应前添加荧光染料羟基萘酚蓝(HNB)或钙黄绿素(Calcein),其结果可以通过肉眼观察反应前后颜色变化来判定并经琼脂糖凝胶电泳验证。对该技术进行特异性、灵敏度分析,利用LAMP和PCR同时检测临床标本。结果设计出针对铜绿假单胞菌OprL基因的恒温扩增检测方法。本恒温扩增检测法只扩增铜绿假单胞菌DNA,对其他菌不扩增,显示出良好的特异性。其最低检测限为17.414 pg/μl,PCR方法最低检出限为174.414 pg/μl,LAMP方法检测灵敏度是PCR方法检测灵敏度的10倍,灵敏度高。LAMP法对临床阳性标本检出率与PCR法相当(27/27)。结论 LAMP方法用于快速检测铜绿假单胞菌具有检测过程简单、实验装置简便、反应结果肉眼可辨别、灵敏度高和特异性强的特点,适合用于现场和基层检疫及医疗单位的快速诊断。

摘要：目的设计结核分枝杆菌高特异性分子信标探针及优化TB-MB-PCR体系,尝试运用荧光分光光度计观测反应后的荧光信号。方法运用软件Beacon designer设计分子信标探针,优化TB-MB-PCR反应体系各组份浓度,运用荧光分光光度计观测反应后的荧光信号。结果优化后的MgCl2、引物、dNTP以及MB在PCR反应体系中的最佳终浓度分别为4mmol/L、0.04μmol/L、0.2mmol/L以及0.04～0.05μmol/L;3种稀释标本TB-MB-PCR阳性产物、TB-MB-PCR阴性产物;TB-PCR阴性产物（空白对照）的荧光信号差异明显。结论高特异性分子信标探针设计较理想、优化后的TB-MB-PCR反应体系灵敏性、特异性好;荧光分光光度仪可直接检测反应产物,有简单、灵敏、准确等优点。

摘要：目的建立肉眼直接判读检测结果的铜绿假单胞菌OprD2耐药基因环介导等温扩增（LAMP）快速检测方法。方法对2011年12月至2012年6月西南医院微生物室收集的47株铜绿假单胞菌标本进行前瞻性研究。利用LAMP针对铜绿假单胞菌OprD2耐药基因设计两对引物，特异性识别OprD2的6个独立区域来快速扩增。通过在LAMP反应体系中加入核酸染料羟基萘酚蓝（HNB），建立可直接用肉眼判读检测结果的LAMP反应体系，并用该方法检测和分析47株铜绿假单胞菌OprD2耐药基因的分布情况及其与抗生素耐受性的相关性。结果设计出针对铜绿假单胞菌OprD2耐药基因可直接肉眼判读结果的恒温扩增检测方法，其检测体系的灵敏度为17．414μg／L，比常规PCR方法（灵敏度：174．14μg／L）高10倍。49％（23／47）的菌株OprD2基因缺失，OprD2基因缺失株的头孢噻肟、左氧氟沙星、氨曲南、哌拉西林、亚胺培南和美罗培南耐药率分别为100％（23／23）、57％（13／23）、48％（11／23）、48％（11／23）、48％（11／23）和43％（10／23）。与OprD2基因阳性株相比，OprD2基因缺失株的亚胺培南、左氧氟沙星和美罗培南耐药比例明显升高，差异有统计学意义（χ2值分别为9．155、4．846、4．037，P值分别为0．002、0．028、0．045）。结论建立了可直接肉眼判读检测结果的铜绿假单胞菌OprD2耐药基因LAMP快速技术。OprD2基因缺失导致铜绿假单胞菌以亚胺培南为主的耐药，因此明确OprD2基因分布状况有助于临床抗菌药物的选用。