摘要：目的探讨并明确量子点核酸传感器检测微生物核酸样本时探针长度对杂交效率和检测结果的影响。方法首先合成金黄色葡萄球菌16S rDNA探针,然后在其5′端添加不同长度的重复碱基序列,分别合成5条长度不同的以胸腺嘧啶结尾的探针;采用巯基法固定金黄色葡萄球菌16S rDNA探针于石英晶体微阵列上,并用石英晶体微天平(QCM)检测样品频率漂移量以判断不同核酸长度时的杂交效率,并用荧光显微镜观察形成不同双链复合物的荧光强度和荧光效率,以此判断不同碱基序列长度探针对荧光效率和杂交效率的影响,并运用SPSS软件对数据进行统计分析。结果对于普通的短链核酸杂交反应,随着探针长度增加,杂交效率呈现依次递增的趋势,当离子强度为40mmol/L时,杂交效率和荧光强度增加最快,其后再增加探针长度,杂交效率增加速度变缓。结论探针长度是影响杂交效率的主要原因之一,通过增加探针长度可以提高杂交效率和荧光强度,但同时也会增加二聚体产生概率,故应根据实际需要设计长度适合的探针。

摘要：目的建立一种快速检测血液感染病原菌的方法。方法选取7种常见血液感染病原菌,在其16SrRNA末端和23S rRNA始端的保守区设计通用引物,对16S-23S rRNA基因间区进行扩增,然后将PCR产物的电泳图谱进行机器码识别,以鉴定病原菌。结果通用引物能扩增出7种病原菌,且每种菌具有不同片段长度(bp):大肠埃希菌(716、808),金黄色葡萄球菌(732、827),铜绿假单胞菌(833),表皮葡萄球菌(630、722、817),肺炎链球菌(606),肺炎克雷伯菌(550、705、797),粪肠球菌(591、693);此图谱可经机器码识别,对各种病原菌进行快速鉴定。结论采用通用引物PCR和机器码识别技术可简便、快速、特异地鉴定常见血液感染病原菌。

摘要：目的　研制与开发组合靶基因自动检测仪应用软件。方法　应用VB6 .0编程语言及Access 97数据库实现压电石英谐振频率的实时检测与分析。结果　实现了组合靶基因自动检测仪压电石英谐振频率的实时检测、数据分析、结果保存与数据转换等。结论　组合靶基因自动检测仪应用软件是一类可实时检测与分析压电石英谐振频率的新型实用性软件 ,可广泛应用于压电石英谐振频率的检测。

摘要：目的　建立一种利用MCSP的PCR扩增产物快速检测和鉴别细菌的方法。方法　分析 3种致病菌MCSP序列 ,针对不同细菌的MCSP的冷休克域的基因序列 ,设计了一对通用PCR引物 ,直接以细菌体为模板 ,相同条件下同时扩增多种细菌的MCSP基因序列。结果　对TouchdownPCR条件进行优化后 ,同时扩增出 3种细菌MCSP基因序列 ,经过电泳和基因测序 ,确认PCR扩增产物即为扩增靶序列。结论　具有高度同源性不同种细菌的MCSP基因片段之间存在足够的碱基差异 ,将细菌鉴别至种 ,甚至鉴别至属。与 1 6srRNA相比较更具有实用价值。与基因芯片技术相结合 。

摘要：目的探讨单碱基靶点分子探针设计模型,并应用设计的分子信标探针检测结核杆菌耐乙胺丁醇embB285 codon点突变,并与测序结果比较以验证。方法运用软件Beacon designer设计embB基因包含285 codon的分子信标,应用荧光分光光度计检测embB 285 codon扩增片段与探针杂交后荧光信号,同时对扩增产物测序并作比较。结果通过荧光分光光度计观测到结核标准株及耐乙胺丁醇embB 285 codon PCR产物与分子信标杂交后荧光信号差异存在统计学意义;33株耐乙胺丁醇组与10株H37RV标准株对照组荧光信号强度比较,耐乙胺丁醇组embB 285 codon突变检出率为15%,测序法突变检出率为15%。结论分子信标技术对单碱基靶点突变具有较高的检出率;应用荧光分光光度计直接检测液相杂交荧光具灵敏、简单、准确等优点。

摘要：目的选择结核杆菌耐链霉素(Sm)Rrs基因包含主要突变位点的序列设计发夹探针及其单侧延长臂发夹探针,建立扩增体系及发夹探针芯片检测方法。方法运用Beacon designer软件设计Rrs基因包含主要突变位点的发夹探针及其单侧延长臂发夹探针,建立其扩增体系及发夹探针芯片检测方法,应用荧光显微镜检测荧光信号。结果通过荧光显微镜检测到标准株及耐SM株PCR产物与发夹探针杂交后荧光信号区别明显;51株耐链霉素(SM)与10株H37RV标准株对照组荧光信号强度比较,耐SM组Rrs基因突变检出率为29%(P<0.05、P<0.01)。结论发夹探针技术是一种具有高灵敏核酸点突变检测技术。单侧延长臂发夹探针对解决发夹探针在芯片表面固定难题提供了一种有效方法,采用荧光显微镜观测荧光信号具有更强的荧光信号识别、放大功能及结果判断更准确等优点。

摘要：目的探讨建立一种基于毛细管电泳-单链构象多态性(CE-SSCP)技术的血液感染病原菌快速检测方法。方法选取常见血液感染病原菌,查询其基因组序列,在其保守区域设计通用引物进行PCR扩增,然后进行CE-SSCP分析,测定不同病原菌所对应的出峰时间及不同浓度的PCR产物所对应的峰面积;用标准菌株建立各菌的CE-SSCP特异图谱,用临床菌株进行验证;以大肠埃希菌为研究对象,挑取浓度为10～108 CFU/ml的菌液,研究该方法的最低检出浓度。结果所设计引物能够成功扩增所研究的6种病原菌,电泳中未见明显引物二聚体和非特性条带;CE-SSCP分析显示,6种菌的出峰时间各不相同,金黄色葡萄球菌为4082、大肠埃希菌为3999、铜绿假单胞菌为3958、表皮葡萄球菌为4063、肺炎克雷伯菌为3980、粪肠球菌为4166、肺炎链球菌为4055;不同浓度的PCR产物对应不同大小的峰面积,浓度>10ng/L是两者呈良好的线性关系;CE-SSCP法最低可检测18CFU/ml的菌液。结论利用CE-SSCP技术检测血液感染病原菌快速、灵敏,而且不受抗菌药物影响,尤其适合对难培养菌的检测,可以与传统方法互补。

摘要：目的　应用自行研制的压电基因传感器检测巨细胞病毒临床标本的PCR产物 ,探讨压电传感器检测核酸反应的可行性以及各种影响因素。方法　设计特异性DNA探针巯基法固定于传感器晶振表面并调节谐振频率在液相中稳定性达到± 1Hz ,定量加入 65份巨细胞病毒临床标本的PCR产物并观察核酸反应导致的频率变化情况 ,并与PCR产物的电泳结果作对照。结果　加入HCMVPCR阳性产物的传感器谐振频率明显下降 ,3 8例阳性产物的平均频率下降值为73 66Hz ,阴性产物的频率没有变化。与PCR电泳结果的阳性符合率为 86 8%,阴性符合率为 93 10 %。

摘要：目的研究毛细管-单链构象多态性(capillary electrophoresis-single strand conformation polymorphism,CE-SSCP)分析技术鉴定血液感染病原菌的可行性,并建立一种快速检测病原菌的新方法。方法选取7种常见血液感染病原菌,在其16S rRNA的保守区设计通用引物,对16S rRNA基因进行扩增,然后将PCR产物进行CE-SSCP分析,依靠CE-SSCP图谱来鉴定病原菌。结果通用引物能够扩增出7种病原菌;CE-SSCP分析后每种菌具有不同出峰时间:大肠杆菌(3999);金黄色葡萄球菌(4082);铜绿假单胞菌(3958);表皮葡萄球菌(4063);肺炎链球菌(4055);肺炎克雷伯菌(3980);粪肠球菌(4166)。结论采用毛细管电泳-单链构象多态性分析技术可简便、快速地鉴定常见血液感染病原菌。

摘要：目的研究运用压电石英晶体生物传感器对产气荚膜梭菌α毒素(CPα)进行检测的方法和反应条件。方法按照碱基配对的原则,设计特异的产气荚膜梭菌α毒素基因寡核苷酸探针并利用巯基自组装技术固定在石英晶体上,运用压电石英晶体生物传感器的"质量效应"对聚合酶链反应(PCR)扩增得到的产气荚膜梭菌α毒素靶基因进行杂交检测,并探讨不同pH值和不同离子强度的缓冲液对检测的影响。结果压电石英晶体生物传感器成功检测出产气荚膜梭菌α毒素;pH7.6的缓冲液和0.64mol/L的NaCl溶液最适合于检测。结论压电石英晶体生物传感器能够有效地检测产气荚膜梭菌α毒素,有望对临床上开展毒素诊断提供一种新的手段。