摘要：背景:药物治疗杜氏肌营养不良症并不理想,近年来越来越多的科学家尝试用间充质干细胞移植治疗杜氏肌营养不良症。目的:旨在通过间充质干细胞治疗杜氏肌营养不良症进展的总结,指导动物实验,以促进其临床应用。方法:由第一作者应用计算机检索Pub Med,中国期刊全文数据库(CNKI)2005年1月至2014年6月相关文献。在标题、摘要、关键词中以"Duchenne muscular dystrophy,mesenchymal stem cells,stem cell transplantation"或以"杜氏肌营养不良症,间充质干细胞,干细胞移植"为检索词进行检索。选择文章内容与间充质干细胞治疗杜氏肌营养不良症有关者,同一领域文献选择近期发表在权威杂志的文章。结果与结论:初检得到317篇文献,根据纳入标准选择41篇文献进行综述。主要通过增加间充质干细胞归巢数量,提高抗肌萎缩蛋白的表达来达到治疗杜氏肌营养不良症目的,常用方法有选择较理想的种子细胞、预处理细胞、改善移植途径、干预归巢过程等。间充质干细胞可以从根本上治疗杜氏肌营养不良症,并且能避免药物治疗的不良反应,具有广阔应用前景。

摘要：目的观察胎儿肌肉来源细胞(f MDC)体外成肌分化能力以及在mdx鼠体内再生抗肌营养不良蛋白。方法使用含10%新生牛血清的DMEM/F12培养液,采用预贴壁方法从胎儿肌肉组织中分离f MDC。采用免疫染色鉴定肌肉特异标志的表达。肌内注射f MDC到6.5 Gy照射3 d后的mdx小鼠股直肌,1个月后采用免疫荧光染色法和RT-PCR方法检测人抗肌营养不良蛋白和基因的表达。结果采用预贴壁方法可从胎儿肌肉组织中分离到贴壁生长、梭型的f MDC。可在f MDC的一些长纤维细胞包浆中检测到MHC的表达,在一些细胞胞核中检测到成肌素的表达。可在注射f MDC的mdx小鼠肌肉中检测到人抗肌营养不良蛋白和基因的表达。结论 f MDC中存在MHC和成肌素的阳性表达,注射f MDC到照射过的mdx小鼠体内可以再生抗肌营养不良蛋白表达。

摘要：背景：国内外已基于不同研究需要建立了多种肝纤维化动物模型方法，多采用大鼠为实验对象，但大鼠血容量少，不利于生化指标的检测。目的：探讨容易重复而且可靠的肝纤维化模型制作方法，并通过骨髓干细胞自体肝门静脉移植给予治疗，判定其疗效和安全性。设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2004—09／2006-03在解放军昆明总医院干细胞与组织工程研究中心完成。材料：肝功能检查正常的健康日本大耳白兔38只，体质量2．0-2．5kg，随机分为2组：健康对照组8只，模型组30只。方法：连续12周皮下注射硫代乙酰胺诱导兔肝纤维化，将造模成功的17只大鼠分为移植组与空白对照组。采集移植组兔骨髓，分离获得骨髓单个核细胞，加入肝细胞生长因子和粒单细胞集落刺激因子对骨髓干细胞进行诱导分化72h，经肝门静脉自体移植。主要观察指标：移植后4周通过病理与生化指标分析诱导后骨髓干细胞对肝纤维化的治疗作用。结果：注射硫代乙酰胺12周时，病理切片显示肝小叶结构破坏，肝索排列紊乱，肝细胞脂肪变性，有少许坏死，间质纤维组织增生，有部分伸入小叶，有炎性细胞浸润，为肝纤维化症状。经兔肝门静脉移植骨髓干细胞4周后，总蛋白、清蛋白和白球蛋白比值均有所提高，总胆红素、直接胆红素、谷丙转氨酶和谷草转氨酶均有所降低，空白对照组也有改善，移植组肝纤维化病变较空白对照组改善程度明显。结论：皮下注射硫代乙酰胺能成功诱导兔肝纤维化，且致死率低，容易重复；骨髓干细胞移植有治疗肝纤维化的作用，有助于肝组织结构恢复和改善肝功能。

摘要：目的传统的检测CMVpp65抗原的方法是间接免疫荧光,操作麻烦,步骤较多,整个实验需要6个多小时,而且只能定性。需要寻找一种简便的可以定量的方法来检测CMVpp65抗原阳性细胞。因此我们设计了流式的方法来检测CMVpp65抗原阳性细胞。方法我们用间接免疫荧光试剂盒中的一抗和购自invitrogen公司的二抗进行了流式标记移植病人外周血中的WBC,操作步骤明显简便了,只需不到2 h就可完成检测,而且可以定量检测CMVpp65抗原阳性细胞。同时我们用荧光定量PCR检测病人尿中的CMV基因的拷贝数。结果流式检测阳性率高的标本,用间接免疫荧光方法检测也为阳性,同时流式检测强阳性的病人尿用荧光定量PCR检测到CMV基因,表明病人处于CMV病毒血症。结论我们用间接免疫荧光试剂盒中的一抗和购自invitrogen公司的二抗进行流式标记,成功检测了移植病人的CMVpp65抗原阳性细胞的百分比,新方法可以定量,与荧光定量PCR方法检测病人尿中的CMV基因的结果符合率较高,可以推广应用。

摘要：目的 :建立一种新的前胶原基因探针制备方法 ,并用其检测HSC的前胶原mRNA表达。方法 :从NCBIGeneBank查询Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型前胶原基因的序列 ,根据基因序列用OLIGO软件设计其引物 ;RT PCR扩增基因 ,并用不对称PCR方法和DIG dUTP标记前胶原基因探针 ,用其原位杂交检测HSC前胶原基因表达。结果 :用所设计的引物和RT PCR扩增得到目的基因 ,制备了DIG标记的前胶原基因探针 ,并用其检测到HSC的前胶原基因表达。结论 :建立了一种新的、较简易的前胶原基因探针标记方法 。

摘要：目的探索山羊胎肝内定位注射不同体积间充质干细胞(MSC)对胎羊发育的影响。方法以B超探查10只疑似怀孕的母山羊,观察胎羊数量、胎羊性别,确定胎肝位置。怀孕约3个月时,在B超引导下穿刺至胎肝,注射不同体积和不同数量的雄性山羊骨髓MSC悬液到胎肝实质区域,精心护理并观察穿刺母羊是否流产。结果借助B超探查10只疑似怀孕母羊中的6只怀孕,可以发现胎心跳动和胎肝血流并确定胎肝的位置,在B超引导下能够准确注射MSC悬液至胎肝实质区域,注射1 ml MSC悬液,不会引起流产,安全可行;而注射同等细胞数量的4 ml MSC悬液,则导致穿刺山羊流产。结论 B超显影可确诊山羊怀孕和确定胎肝位置,胎肝内注射1 m山羊骨髓MSC悬液不会导致胎羊流产,MSC数量不变而体积增加至4 ml时易导致胎羊流产。