摘要：高等学校课堂教学是高等学校教学的主要组织形式,是保障高等学校其它教学方式取得成功的基础。要取得好的高等学校课堂教学效果,需要高校教育工作者不断探索和总结。从课堂设计、现代教育技术应用以及课堂教学语言的使用等角度进行了分析和探讨,以促进高等学校课堂教学效果的进一步提升。

摘要：目的 :从幽门螺杆菌 (H .pylori)中克隆中性白细胞激活蛋白基因napA并构建重组载体。方法 :提取H .pylori郑州分离株MEL HP2 7基因组DNA作模板 ;根据H .pyloriJ99全基因组序列设计napAPCR引物 ,高保真酶扩增napA片断 ;限制性内切酶切PCR产物和pNEB193空质粒 ,T4DNA酶连接酶切产物 ,重组质粒转化E .coliTB1工程菌 ,蓝白斑试验筛选阳性克隆 ;提取质粒经酶切鉴定后测序并利用生物学软件进行序列分析。结果 :DNA限制性内切酶可从重组质粒pNEB napA的EcoRⅠ和SalⅠ位点之间切出一个 4 35bp的DNA片断 ,测序结果与J99napA同源性为 96 .5 % ,与H .pylori其他菌株的同源性为 92 %～ 97%。结论 :成功构建H .pylori中性白细胞激活蛋白基因的重组质粒pNEB napA ;序列分析表明HP napA是一类高度保守的原核型基因 ,可作为H .pylori疫苗候选基因。

摘要：目的利用CRISPR/Cas9系统构建稳定敲除4.1R基因的RAW264.7巨噬细胞株,为研究4.1R在巨噬细胞中的功能奠定基础。方法根据CRISPR/Cas9靶向原理设计并合成3个特异性识别4.1R基因的向导RNA(sgRNA),构建sgRNAlenti CRISPRv2重组质粒并转入293T细胞中制备sgRNA-Cas9慢病毒,慢病毒侵染RAW264.7细胞,嘌呤霉素筛选出阳性细胞并稀释至单克隆,Western blotting印记检测单克隆细胞中蛋白4.1R的表达,测序确认单克隆细胞中突变位点。结果 Western blotting印迹检测结果表明筛选出的1株单克隆细胞中蛋白4.1R的表达完全缺失;测序结果表明该细胞株中4.1R基因发生了19bp的缺失突变;并且4.1R基因敲除后,RAW264.7细胞的增殖能力显著增加。结论本研究利用CRISPR/Cas9系统成功的干扰了巨噬细胞系RAW264.7细胞中4.1R的表达,为研究4.1R在巨噬细胞中的功能提供了有效工具。

摘要：目的:克隆T细胞可诱导共刺激分子配体胞外段(ICOSL-N)基因,构建pET22b-ICOSL-N-Ig原核表达载体,实现ICOSL-N与IgG4体外融合表达。方法:设计并合成T细胞ICOSL-N和IgG4基因特异性引物,RT-PCR法从小鼠脾脏中克隆出ICOSL-N,PCR重叠延伸技术将ICOSL-N与IgG4基因融合,构建原核表达载体pET22b-ICOSL-N-Ig,转化*** BL21(DE3)工程菌,筛选鉴定阳性克隆,IPTG诱导阳性重组子,SDS-PAGE法鉴定融合蛋白ICOSL-N-Ig的表达。结果:融合基因ICOSL-N-Ig的PCR扩增产物大小约1425 bp,符合理论值;原核表达载体pET22b-ICOSL-N-Ig经酶切、PCR和测序鉴定结果符合预期;在诱导后的菌体中检测出大小为53800的蛋白诱导条带,且与目标蛋白的大小一致。结论:成功克隆ICOSL-N基因,实现ICOSL-N在*** BL21(DE3)工程菌中与IgG4的融合表达。

摘要：目的:设计特异抑制缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白诱导表达的小干扰RNA(siRNA)序列,并构建能长效抑制HIF-1α基因表达的HIF-1α的短发夹siRNA(shRNA)表达载体。方法:依据NCBI数据库获得HIF-1αmR-NA序列,利用Whitehouse、SiDirect和Rationalsi RNA Design软件及Blast设计和优化siRNA序列;将siRNA序列转换成编码shRNA的DNA序列后克隆入pENTRTM/H1/TO载体,测序鉴定;将重组质粒pENTRTM/H1/TOHIF-1α转染食管上皮细胞Het-1A(实验组),并设阴性对照(转染阴性对照序列)、空白对照组和诱导对照组。实验、阴性对照和诱导对照组细胞经CoCl2化学诱导。Western blot法检测4组HIF-1α蛋白的表达。结果:以优化改造的含29核苷酸的干扰序列构建shRNA表达载体,经测序鉴定无误。4组细胞HIF-1α蛋白表达比较,差异有统计学意义(F=66.863,P<0.001)。实验组Het-1A细胞HIF-1α蛋白表达较诱导对照和阴性对照组明显下降。结论:成功构建了HIF-1αshRNA表达载体。