摘要：利用中国知网期刊2011—2020年基于语料库的日语写作研究数据,分析该领域的研究趋势、研究方法与研究主题。研究发现:我国语料库日语写作研究半数以上是根据自建小型语料库进行的组内共时实证研究,主要涉及日语专业学生、非日语专业学生、英日专业学生与日语本族语者;研究成果中写作结果研究数量最多,写作影响因素与写作教学次之,读者反馈略有涉及,写作过程、写作评估与写作研究回顾没有任何成果。

摘要：为了研究苜蓿青贮对奶牛氮排泄特征的影响,以优化饲料资源、减少氮排泄对环境的污染,试验采用单因素完全随机设计方法将条件相近的90头奶牛分为2组,苜蓿干草组为对照组、苜蓿青贮组为试验组,研究苜蓿青贮对奶牛氮排泄特征的影响。结果表明:苜蓿干草组奶牛日均粪氮排出量为0.112 kg/d,氮表观代谢率为95.95%;苜蓿青贮组奶牛日均粪氮排出量为0.085 kg/d,氮表观代谢率为97.38%。试验全期苜蓿青贮组奶牛氮表观代谢率显著高于苜蓿干草组(P<0.05),高1.49%。说明苜蓿青贮既提高了奶牛氮表观代谢率,又减少了粪氮的排泄量,降低了粪氮对环境的污染。

摘要：针对美洲型猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)保守的N蛋白基因设计了一套RT-LAMP的检测引物,通过优化反应条件,建立了一种检测PRRSV的RT-LAMP诊断方法。特异性和敏感性试验结果显示,该方法能够特异地检测美洲型PRRSV,其最低检测限为10个拷贝,而RT-PCR的最低检出限为1×104个拷贝。分别用建立的RT-LAMP法与RT-PCR法对临床50份样品进行检测,结果二者的符合率在96%以上,呈现很好的一致性。表明,建立的RT-LAMP法可应用于PRRSV的快速检测。

摘要：根据GenBank中的I型鸭肝炎病毒全基因序列设计了扩增I型鸭肝炎病毒VP1、3D基因的引物,用该特异性表达引物从I型鸭肝炎病毒cDNA模板中扩增得到目的基因VP1、3D,用相同的限制性内切酶酶切目的基因和表达载体pET32a后构建重组表达载体,转化宿主BL21(DE3),用不同浓度的IPTG诱导VP1、3D基因的表达,收集菌液进行SDS-PAGE电泳,Western-blotting分析蛋白免疫原性。结果表明,VP1、3D在大肠杆菌中表达量较高,表达产物的分子量约为48kD、68kD,并能被兔抗DHV-1血清所识别。I型鸭肝炎病毒VP1、3D蛋白在大肠杆菌中表达产物具有免疫原性。

摘要：本文阐述一种妥善的宠物殡葬解决方案,以网上墓园的形式提供一种简单可行,又能很好的被社会大众所接受的殡葬方法。并以此为出发点,创造一种健康正确的宠物殡葬服务理念,改变社会大众对宠物殡葬的错误认识,赢得政府的政策支持,进一步建造一个完整完善的宠物善终服务体系。

摘要：根据Genbank中的Ⅰ型鸭肝炎病毒全基因序列设计了扩增Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因的包含有EcoRV和XhoⅠ酶切位点的引物,用该特异性引物从Ⅰ型鸭肝炎病毒cDNA模板中扩增得到目的基因VP1,以相同的限制性内切酶酶切目的基因和表达载体pET32a后构建重组表达载体,经酶切及PCR鉴定筛选出阳性克隆,测序证明目的基因正确插入了表达载体,转化宿主菌RossetaⅡ,用不同浓度的IPTG诱导VP1基因的表达,收集菌液进行SDS-PAGE电泳,Western-blotting分析蛋白免疫原性。结果表明,VP1在大肠杆菌RossetaⅡ中表达量较高,表达产物的分子量约为48 ku、并能被Ⅰ型鸭肝炎病毒阳性血清所识别。Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1蛋白在大肠杆菌RossetaⅡ中表达产物具有免疫原性。

摘要：根据Genbank中的Ⅰ型鸭肝炎病毒全基因序列,应用Primer 5.0分析软件设计合成了扩增I型鸭肝炎病毒3D基因的一对引物,用该特异性表达引物体外克隆Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒3D基因,构建重组表达质粒pET32a-3D,将此重组质粒转化到受体菌RossetaⅡ(DE3)中进行诱导表达。SDS-PAGE和蛋白质印迹分析表明,诱导4 h后表达量达到最高,表达产物大小约为70 Ku,表达蛋白能与I型鸭病毒性肝炎阳性血清产生特异性免疫反应。

摘要：根据GenBank收录的PRRSV基因序列,利用PRRSV经典变异株与缺失变异株NSP2基因序列特点,设计合成两对特异性引物,经RT-PCR扩增后,用T4连接酶将目的片段与pMD18-T载体连接,并转化到大肠杆菌DH-5a株感受态细胞。提取的质粒经PCR、酶切和测序鉴定,证实为PRRSV缺失变异株与经典变异株的阳性重组质粒。将重组标准质粒进行10倍系列稀释后作为模板,通过实时荧光定量PCR法(Real-timePCR),建立了PRRSV缺失变异株与经典变异株的标准曲线及其直线回归方程,并确定其最佳读板温度。该方法具有线性关系好、特异性强、敏感性高、重复性好等特点,为鉴别诊断及分析PRRSV缺失变异株与经典变异株感染猪体内病毒的绝对含量提供了技术手段。