摘要：目的　研制线性探针分析法检测结核分枝杆菌 (结核菌 )rpoB基因耐药突变试剂盒。方法　设计 15条结核菌rpoB基因野生型和突变型的线性探针 ,固定尼龙膜上 ;在rpoB基因引物上标记生物素 ,扩增结核菌DNA ,获得生物素标记扩增产物 ,与rpoB基因线性探针杂交 ,加入标记过氧化物酶的亲合素 ,再加四甲基联苯胺显色。结果　应用线性探针分析法检测 87株结核菌 ,其与rpoB基因直接测序法、传统药敏法符合率分别为 98 8% (82 / 83)和 94 3% (82 / 87)。结论　线性探针分析法检测rpoB耐药基因突变是一种操作简便、特异性高、敏感性高 ,易开展的方法。

摘要：目的开发快速检测耐利福平与异烟肼结核分枝杆菌rpoB、katGi、nhA基因突变的DNA芯片。方法根据结核分枝杆菌rpoB、katGi、nhA基因序列设计探针并制作基因芯片,从临床样品中分离出结核分枝杆菌的基因组DNA,PCR扩增含有上述几个基因突变位点的特异DNA片段,并事先在PCR引物的5′端作生物素标记,然后与膜条芯片上的检测特异突变位点的寡核苷酸探针进行杂交,通过生物素-链霉亲和素-过氧化物酶体系显色,直接观察突变情况,以此来判断耐药结果。结果35个利福平和异烟肼单耐药或多药耐药的结核分枝杆菌中有82.9%用芯片法检出的结果与药敏培养法一致;其中利福平耐药样品突变检出率为100.0%;有20.0%异烟肼耐药的样品芯片未检出突变,可能是突变发生在芯片检测位点范围之外。结论用DNA芯片检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药性,具有较高的特异性和敏感性,可用于临床结核分枝杆菌耐药性检测。

摘要：目的建立一种临床上切实可行的非缺失型α-地中海贫血基因检测方法。方法中国人常见的非缺失α-地中海贫血为αCSα、αQSα、αWSα3种类型,针对此3个位点设计特异性带有生物素标记的引物进行PCR扩增,扩增产物与固定在膜条上的寡核苷酸探针进行杂交,并通过一系列显色反应分析结果。结果分别分析3种突变类型的正常及突变位点信号,明确检测样品在3个位点是否发生了突变,及是否为突变纯合子或杂合子,验证了该方法可诊断非缺失型!-地中海贫血点突变。结论该检测方法结果可靠,且简便易行,对实验室仪器设备要求不高,适合于在临床推广。

摘要：目的　开发快速检测耐利福平结核分枝杆菌 (结核菌 )rpoB基因突变的DNA芯片。方法　根据结核菌rpoB基因序列设计探针并制作基因芯片 ,从临床样品中分离出结核菌的基因组DNA ,PCR扩增含有rpoB基因突变位点的特异DNA片段 ,荧光标记后与芯片上含有的检测特异突变位点的寡核苷酸探针进行杂交 ,同时与DNA直接测序法测定序列比较。结果　 35株耐利福平结核菌中有 91 4 % (32 / 35 )用直接测序法检测出存在rpoB基因突变 ,DNA芯片的检测效率为 71 4 % (2 5 / 35 )。结论　用DNA芯片检测结核菌对利福平的耐药性具有较高的特异性和敏感性 ,可用于临床结核菌耐药性检测。

摘要：目的通过PCR及芯片杂交技术平台,建立临床样品中结核分枝杆菌及耐药基因突变的快速诊断新方法。方法根据结核分支杆菌标准株H37Rv序列,我们设计了覆盖rpoB基因81个碱基高变区的5个正常探针和6个可以探测特定突变类型的突变探针,制作膜芯片,并检测临床样品中结核杆菌的基突变情况,以此来判断耐药结果。结果18个利福平培养耐药中的15个样品都在rpoB基因上检出有突变,利福平耐药突变检出率为83.0%(18/15);25个利福平敏感样品rpoB基因上都未检出突变。20个异烟肼培养耐药的样品中有16个在katG或inhA基因上检出有突变,异烟肼耐药突变检出率为80.0%(16/20);25个异烟肼敏感样品katG或inhA基因上都未检出突变。结论用膜芯片检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药性,具有较高的特异性和敏感性,可用于临床结核杆菌耐药性检测。并具有快速、简便、敏感的特点。