摘要：从台州市剑门港海区的海底淤泥中采集样品分离得到4株具抗菌活性的微生物,其中一株具有较强的抗菌活性。对该菌作了形态学、生理生化、分子生物学、(G+C)mol%含量等研究,确定该菌株属于芽孢杆菌属,命名为Bacillus amyloliquefaciens MBRC1。采用BLAST Clustal W(V1.83)及Mega(V 5.1)等软件对其进行了系统发育树的分析,确立了该菌株在系统发育上的地位。采用不同的培养基对该菌株进行发酵培养,利用牛津杯法对该菌胞外的抑菌活性物质的抑菌效果进行了研究,结果显示:Bacillus amyloliquefaciens MBRC1胞外具有较强的抑菌活性物质,且对金黄色葡萄球菌(S. aureus)、枯草杆菌(B. subtilis)和大肠杆菌(E. coli)均有较好的抑菌效果。

摘要：为获得耐碱性β-葡萄糖苷酶,进一步研究碱性β-葡萄糖苷酶的酶学性质。从实验室已有蜂蜜中筛选出一株耐碱性的高地芽孢杆菌Bacillus altitudinis SYBC hb4,根据Bacillus altitudinis SYBC hb4中β-葡萄糖苷酶(bglA)基因序列设计一对引物,通过PCR扩增技术,获得β-葡萄糖苷酶基因(bglA),将扩增后的bglA与质粒pColdII构建重组表达载体pColdII-bglA,并转化至大肠杆菌*** BL21(DE3)中表达。重组表达的β-葡萄糖苷酶酶活可达12.40 U/mL;该重组β-葡萄糖苷酶最适反应温度为60℃;最适反应pH值为pH 8.0;5 mmol/L的Mg^(2+)可使酶活提高50%左右。本实验所获得的碱性β-葡萄糖苷酶比已报道的重组酶在碱性条件下稳定性更好。

摘要：用Plackett-Burman试验设计和响应面法(response surface methodology,RSM)对镰刀霉菌JN158产色素的发酵培养基7种营养物质配比进行优化。结果表明:蔗糖、花生饼粉和FeSO4·7H2O的添加量显著影响色素产量;用最陡爬坡试验使这3个显著因素的添加量接近最大响应区域,优化后,镰刀霉菌产色素的培养基添加量分别为:蔗糖30.18 g/L、花生饼粉4.86 g/L、K2HPO4·3H2O 1 g/L、NaCl 0.5 g/L、MgSO4·7H2O 0.5 g/L、CaCl20.5 g/L、FeSO4·7H2O 0.0122 g/L,预测的最大色素产量是1.268 g/L,验证实验得到的色素产量为(1.252±0.011)g/L,与预测值相近,优化后色素的产量是以前的2.9倍。

摘要：研究了高山被孢霉液态发酵产花生四烯酸过程中主要底物和培养条件对花生四烯酸产量的影响。采用单因素和正交试验设计优化了碳源、氮源、无机盐的种类及浓度,找出了最佳的培养温度和变温策略。试验结果显示最佳碳源和氮源及浓度是:玉米粉66 g/L,豆粕粉54 g/L;最佳无机盐配方是:KH_2PO_43 g/L,MgSO_41 g/L,Na_2SO_42 g/L。采取逐级变温培养:30℃(3 d),25℃(4 d),20℃(4 d)。优化后生物量和花生四烯酸产量分别达到52.3和13.6 g/L。

摘要：【目的】提高菌株Trametes hirsuta SYBC-L19漆酶产量,并研究该酶对合成染料脱色的性质。【方法】通过单因素和响应面设计,对产漆酶培养基进行优化。【结果】最优培养基为:玉米粉20.0 g/L、马铃薯淀粉32.4 g/L、酒石酸铵2.9 g/L、吐温80 0.5 g/L、CuSO4.5H2O 2.0 mmol/L、香兰素0.54 mmol/L、NaH2PO4.2H2O 2.0 g/L、MgSO4.7H2O0.5 g/L、MnSO4.H2O 0.1 g/L;最佳培养条件为:培养温度30°C,初始pH 6.0,装液量40 mL/250 mL,接种量8%。【结论】培养8 d酶活达35 U/mL,是优化前的39倍。对漆酶催化合成染料脱色进行了考察,发现该酶在60°C下对偶氮类染料AR1和RB5能迅速脱色,5 min内即可完成。

摘要：从浙江省台州市剑门港海区采集海底淤泥样本,以几丁质作为惟一营养因子,筛选出5株几丁质酶产生菌,对其中一株产酶活性较高的菌株从形态学、生理生化、脂肪酸组成及含量、G+C含量、醌型及分子生物学特征进行了鉴定(gene Bank:HM136777)。结果表明,该菌属于慢生根瘤菌科(Bradyrhizobiaceae),芽生杆菌属(Blastobacter)中的一种,命名为Bradyrhizobiaceae blastobacter SYBC-H2。P-B实验结果显示,几丁质、葡萄糖及玉米浆粉是该菌株产几丁质酶的关键营养因子,利用中心组合设计实验(Contral Composite Design)对该菌株的产酶培养基进行了成分优化,结果表明,当培养基主要成分几丁质、葡萄糖和玉米浆粉质量浓度分别为2.7、0.85、2.64 g/L时,几丁质酶活性最高,达到5.70 U/m L。

摘要：目的构建炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthracis)A16R株lysA基因缺失突变株,为后续的定量蛋白质组学研究奠定基础。方法以炭疽杆菌活疫苗A16R株lysA基因为目的缺失基因,利用软件设计上下游同源臂以及抗性基因的引物,用同源重组酶将3个片段连入质粒中,构建重组质粒,并将重组质粒导入炭疽杆菌A16R感受态细胞中,筛选炭疽杆菌A16R株lysA基因缺失突变株,对其进行验证。最后绘制缺失突变株和野生株生长曲线并进行生理生化分析。结果成功构建了重组质粒,经同源重组后获得lysA基因缺失突变株。鉴定表明目的基因已经丢失。结论成功获得炭疽杆菌A16R株lysA基因缺失突变株,为定量蛋白质组学研究奠定了基础,也为炭疽杆菌重要基因功能的研究建立了良好的技术平台。

摘要：比较了几种不同真菌DNA提取方法对血红密孔菌基因组的提取的影响,根据GenBank中真菌漆酶氨基酸保守序列设计的简并引物,以血红密孔菌基因组总DNA为模板,扩增到一条长度为1084bp的DNA片段。通过BLAST比对,其基因序列与密孔菌属同源性最高,为99%,氨基酸同源性为88%,说明扩增的片段确为密孔菌漆酶基因。

摘要：新金色分枝杆菌Mycobacterium neoaurum JC-12是一株用于转化植物甾醇合成甾体激素类药物中间体的重要菌株,传统的基因编辑方法效率低、周期长、操作复杂并且需带入抗性标签。近期CRISPR(clustered regularly interspaced short palindromic repeats)/Cas9系统在许多非模式菌株中成功应用为本研究提供了参考。作者结合非同源黏性末端连接(NHEJ)构建了应用于新金色分枝杆菌基因组编辑CRISPR-Cas系统,对Mycobacterium neoaurum JC-12基因组上催化雄甾-4-烯-3,17-二酮(AD)合成雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮(ADD)的3-甾酮-脱氢酶(KSDD)分别设计了敲除和转录激活的靶向sgRNA。结果显示成功敲除了ksdd基因并且突变菌株KSDD的酶活下降了80%,突变株发酵96 h的AD产量比原始菌株提高了30%,并且突变株未代谢产生ADD。转录调控结果显示,靶向-29位点相比于无靶向对照ksdd的转录水平下降了38%,而靶向-83位点和-141位点则对ksdd的转录水平分别提升了2.24倍和3.23倍,同时对应的AD和ADD的产量在对-29位点激活时没有显著变化,而AD和ADD的产量在-83位点分别提升了26%和25%,在-141位点分别提升了29.5%和36%。以上研究为进一步对新金色分枝杆菌基因组水平的代谢工程改造提供了更便捷的方式。

摘要：大豆粕、芝麻粕、花生壳和板栗壳是常见的几种可可粉外源掺假成分,根据它们所特有的基因片段设计引物,以高等植物18SrDNA基因为内参照基因,应用改良CTAB法抽提材料DNA,对分离的DNA进行PCR扩增并分析,建立了可可粉中这几种外源植物成分的快速检测方法。用建立的PCR方法对可可基因组进行扩增,均无特异条带;扩增出的PCR产物测序结果表明与目标片段一致;将各材料DNA倍比稀释,分别对各个稀释度的DNA进行PCR扩增。结果表明,该方法对大豆粕、芝麻粕、花生壳和板栗壳DNA检测的敏感度分别可达82.5pg/μl、32.5pg/μl、124pg/μl和157pg/μl。模拟样品试验发现,该方法的最低检测限(w/w)分别达0.5%、0.5%、5%和5%,可作为可可粉及其制品中这几种外源成分鉴别检测的有效方法。