摘要：采用正交设计法对耐底物腈水合酶融合子的发酵条件进行优化,以发酵液起始pH,发酵周期,接种量,装料系数作为考察因素,最终确定最佳发酵条件为:起始pH8.0、发酵周期54h、接种量12%、装液系数12%。在此优化条件下融合子腈水合酶的活力达到1100万U/ml,较优化前提高了83.3%。通过响应面法对发酵培养基配方进行优化研究,采用Plackett-Burman法对8个因素进行了筛选,结果表明,葡萄糖、尿素、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾是影响发酵液腈水合酶产量的主效应因子。用最陡爬坡试验及Central composite design设计进一步优化,利用Design-Expert软件进行二次回归分析,得到各因素的最佳浓度为:葡萄糖22.62g/L、尿素9.76g/L、K2HPO41.22g/L、KH2PO41.268g/L。在此培养基优化配方下融合子腈水合酶的活力达到1280万U/ml,较原配方的酶活提高了16.4%。

摘要：采用紫外诱变和梯度平板法筛选出耐底物的突变株,通过单因素实验考察发酵液起始pH值、装液量、发酵周期、接种量对产酶的影响,确定最佳的发酵条件;采用均匀设计实验优化发酵培养基。筛选出一株能耐受4%丙烯腈的腈水合酶产生菌,在最佳产酶条件下,耐底物突变株的腈水合酶酶活达到11.5MU/mL,与优化前相比,酶活提高了49.35%。腈水合酶耐底物突变株的最佳发酵条件为:初始pH 7.0、装液量16%、发酵周期58 h、接种量10%。最佳发酵培养基配方为:ρ(葡萄糖)=26 g/L,ρ(酵母膏)=2 g/L,ρ(尿素)=4 g/L,ρ(谷氨酸钠)=0.5 g/L,ρ(K2HPO4)=0.2 g/L,ρ(KH2PO4)=0.2 g/L,ρ(MgSO4)=0.05 g/L,φ(DXL)=0.5 mL/L。