摘要：目的　构建一种肝癌细胞靶向性的腺相关病毒载体以用于肝癌的促凋亡基因治疗的研究。方法　通过设计含有特定酶切位点的引物 ,选择性地从人基因组中扩增出人甲胎蛋白 (α fe toprotein ,AFP)启动子序列并克隆到真核表达载体pTR UF5上 ;再通过平端连接的方法 ,构建成含甲胎蛋白启动子和人野生型p5 3基因的重组腺相关病毒 (recombinantadeno associatedvirus,rAAV)质粒rAAV AFP 5 3和绿色荧光蛋白基因GFP(greenfluorescenceprotein)的质粒rAAV AFP GFP。结果　成功地构建了以腺相关病毒为载体、受人甲胎蛋白启动子调控表达人野生型p5 3基因的质粒系统。结论从理论上说 ,我们构建的重组腺相关病毒质粒rAAV AFP p5 3,可以特异性地转染到肝癌细胞中 。

摘要：目的　利用含有人甲胎蛋白启动子的腺相关病毒载体 ,构建能在人肝癌细胞株中特异表达目的基因的质粒。方法　通过设计含有特定酶切位点的引物 ,选择性地从人基因组中扩增出人甲胎蛋白启动子 (AFPpromoter)序列并克隆到含有绿色荧光蛋白 (GFP)报告基因的质粒pTR UF5上 ,构建成含报告基因的重组腺相关病毒质粒rAAV AFP GFP ;再通过平端连接的方法 ,构建成含p5 3基因的质粒rAAV AFP 5 3。通过用rAAV AFP GFP转染表达AFP的HepG2 细胞株和不表达AFP的 2 93细胞株 ,以检测AFP启动子的功能。rAAV AFP 5 3转染HLE肝癌细胞株后 ,用流式细胞分析检测对细胞周期的影响。结果　rAAV AFP GFP和经测序、酶切鉴定证实为含有人AFP启动子的质粒。细胞转染表明rAAV AFP GFP能特异地在AFP阳性细胞中高效表达目的基因 (质粒转染效率为 36 .5 % ) ;rAAV AFP 5 3使HLE的凋亡率达到 73 .88%。结论　成功构建了以腺相关病毒为载体、受人AFP启动子调控表达人野生型p5 3基因和报告基因的质粒。