摘要：背景:核基质附着区是染色质被限制酶消化后仍附着在核基质上的DNA序列,不仅可影响邻近内源基因的表达,还能克服转基因沉默,提高外源基因的转录与表达。目的:探讨在CHO细胞中β-干扰素核基质附着区对氯霉素乙酰转移酶转基因表达的影响。设计、时间及地点:开放性实验,于2006-10/2007-04在新乡医学院生物化学与分子生物学实验室及分子研究室完成。材料:CHO细胞株由中国典型培养物保藏中心提供。含氯霉素乙酰转移酶报告基因及G418筛选标记的质粒pCATG载体由本实验室构建。方法:将PCR扩增得到的人β-干扰素核基质附着区分别用SacI/KpnI及BamHI/SalI酶切,连接至用相应内切酶酶切的pCATG载体上,转化***109,提取质粒行酶切电泳,将构建好的载体命名为pCAT-MAR,该载体含氯霉素乙酰转移酶报告基因表达盒及两侧的β-干扰素核基质附着区。分别用载体pCATG及pCAT-MAR转化CHO细胞,提取具有G418抗性的细胞株基因组DNA,PCR扩增氯霉素乙酰转移酶基因。主要观察指标:ELISA法分析氯霉素乙酰转移酶报告基因的表达。PCR法检测pCAT-MAR载体是否稳定整合在宿主基因组上。结果:①pCATG转化的CHO细胞共筛选出16个阳性细胞株,pCAT-MAR转化的CHO细胞筛选出17个阳性细胞株。β-干扰素核基质附着区可使氯霉素乙酰转移酶报告基因表达水平提高2.8倍,pCATG转化CHO细胞的变异系数为2.0650,pCAT-MAR转化CHO细胞的变异系数仅为0.8131。②稳定转化的细胞株基因组DNA均扩增出437bp目的片段,证明pCAT-MAR载体已经稳定整合到基因组上。结论:β-干扰素核基质附着区能提高转基因在CHO细胞的表达水平,并且可降低不同转化细胞株之间转基因表达的差异性。

摘要：根据克隆的杜氏盐藻14-3-3蛋白的基因序列设计引物,采用RT-PCR方法扩增杜氏盐藻14-3-3蛋白的基因.经原核表达、Ni2+亲和层析法纯化,免疫动物制备抗体.抗体蛋白质印迹分析检测结果表明抗体能特异结合盐藻细胞分子量为29 kD的多肽.

摘要：目的探讨一种结合DNA片段回收扩增目的片段的方法。方法以PCR扩增克隆β-珠蛋白MAR和survivin启动子为例,根据GenBank报道的序列设计引物,PCR扩增克隆β-珠蛋白MAR和survivin启动子。结果 PCR产物有非特异DNA片段、根据DNA片段大小采取凝胶DNA回收与预期片段相符的DNA片段,送公司测序。测序结果表明所扩增的序列和Gen-Bank报道的序列一致。结论用该方法可以成功克隆出目的DNA片段。

摘要：以PCR扩增克隆survivin启动子为例,根据GenBank报道的序列设计引物,PCR扩增克隆survivin启动子。通过软件在线分析扩增的survivin启动子酶切位点,将扩增与预期的片段大小一致的DNA片段进行酶切,再进行测序。结果表明,采取酶切鉴定PCR产物的方法,可以初步对PCR产物是否正确做出判断。

摘要：背景:目前,制备DNA分子量标准的方法主要有2种,一种是用限制性内切酶消化某种DNA,另一种是利用PCR扩增,2种方法各有优缺点。在前期采用PCR技术在前期扩增100～500bp片段的基础上,实验室又成功扩增出600～1000bp片段,PCR产物经过纯化,混匀,制备的DNA Ladder,结果制备DNA Ladder的条带清晰,易于识别,可完全与公司商品化的DNA Ladder相比,完全可用于分子生物学实验。目的:利用PCR扩增技术制备DNA分子量标准参照物。方法:自行构建了一种特殊适宜扩增的质粒pUC-DNA,根据pUC-DNA的基因序列,利用primer5.0设计能特异扩增100～1000bp的PCR引物。PCR扩增出100～1000bp大小的DNA片段,在2%琼脂糖凝胶中电泳观察结果。用凝胶回收试剂盒回收目的PCR产物,测序结果与pUC-DNA上基因序列进行序列比对,Blast进行同源性分析。将PCR产物用酚/氯仿抽提,乙醇沉淀,按比例混匀,即可使用。结果与结论:利用PCR技术能够成功扩增出100～1000bp条带,片段大小与预期结果相符,片段序列与GenBank序列完全一致,利用回收片段制备的DNA Ladder条带清晰,可与同类产品相比。

摘要：报道了一种简便的制备分子量大小为100-1000bp DNA marker的方法,其原理是以一段特异的DNA片段为模板,设计PCR引物,采用多重PCR的方法一次扩增100-1000bp系列条带,酚/氯仿抽提,乙醇沉淀,即可得到条带清晰的DNA marker。

摘要：根据GenBank登录的序列号,使用primer5.0进行引物设计,提取人的外周血基因组DNA为模板,PCR方法扩增出人β-珠蛋白MAR序列,将MAR序列插入到逆转录病毒表达载体pLXSN,构建MAR序列介导的逆转录病毒载体。酶切和测序鉴定后,阳离子聚合物转染PA317细胞,G418筛选出阳性细胞克隆,提取病毒液上清,测定逆转录病毒颗粒滴度,逆转录病毒颗粒的最高滴度为1.6×106CFU/mL,成功建立了MAR介导的逆转录病毒包装细胞系。

摘要：背景:DNA模板质量对DNA序列测定起着至关重要的作用。目的:为基因组DNA或甲基化DNA测序寻找一种经济,简便的方法。方法:分别采用96管集合板及96孔板提取质粒,并且针对质粒设计一对包含目的片段的引物,扩增后纯化PCR产物,通过以上3种方法制备DNA测序模板进行测序。结果与结论:实验所采用的3种方法对于基因组DNA测序效果无差异(P>0.05)。对于甲基化DNA测序效果,96管集合板法优于其他2种方法(P<0.05)。说明3种方法均适用于基因组DNA的测序,而96管集合板法更适用于甲基化DNA的测序。

摘要：生物化学是临床医学及相关专业必修的专业基础课,在医学生知识体系建构中起重要作用。线上线下相结合的智慧教学模式已经取得了良好的教学效果,但由于医学生物化学内容复杂抽象,教师在教学中仍需进一步改革教学方法,构建新的教学体系,促进课程建设。该研究提出智慧教学模式下将生物化学歌曲融入教学实践的设计。结果表明,该教学设计不仅创新了教学方式,还提高了学生的学习兴趣,帮助其理解和记忆,加深了课堂思政,提高了教学质量,促进了课程建设。

摘要：目的探讨分析中国豫北地区汉族心脑血管疾病患者和健康人群血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)rs4076317、rs1044250等位基因多态性分布频率、脂类代谢特点,以及rs4076317、rs1044250等位基因与脂类代谢的关系。方法收集2018年12月至2019年12月安阳地区医院住院患者和健康体检人群资料:冠心病组患者(CAD组)143例,缺血性卒中组患者(IS组)130例,健康体检人群(对照组)115例。检测每位研究对象血脂水平;提取每位研究对象血液总DNA,设计rs4076317、rs1044250扩增片段引物,PCR扩增,扩增产物测序;统计分析ANGPTL4 rs4076317、rs1044250等位基因在不同组分布频率有无差异和rs4076317危险度OR值;比较不同组rs4076317、rs1044250不同基因型所对应的血脂水平有无差异,以及不同组血脂水平有无差异。结果(1)CAD组和IS组rs4076317等位基因CC、GC型分布频率与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。CAD组、IS组和对照组rs1044250等位基因CC、CT型同类基因型分布频率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。CAD组和IS组OR值分别与对照组比较,rs4076317等位基因型CC、GC型危险度OR值分别为0.813、1.709、0.787、1.806,差异有统计学意义(P0.05)。CAD组、IS组和对照组rs4076317基因CC基因型所对应的CHOL、HDL-C、LDL-C水平与GC型分别比较,差异无统计学意义(P>0.05),其TG水平比较,CC型均低于GC型,差异有统计学意义(P0.05)。结论中国豫北汉族人群冠心病患者、缺血性卒中患者ANGPTL4 rs4076317等位基因多态性与正常健康人群组分布频率比较有差异,其野生CC型对避免疾病发生具有保护性,杂合突变GC型对疾病发生具有危险性,rs1044250等位基因多态性与正常健康人群组分布频率比较无差异。冠心病患者、缺血性卒中患者ANGPTL4 rs4076317基因多态性与TG代谢指标有关。ANGPTL4 rs4076317等位基因和脂代谢特点,可以作为临床心脑血管疾病风险评估指标,亦对高脂血症病因分析具有一定的帮助。