摘要：光合细菌 ***可溶性氢酶由 52 k Da和 2 1.5k Da两个亚基组成 .该酶大亚基 N-末端氨基酸序列为 :SRTITIEPVTRXEGHAR,小亚基 N末端氨基酸序列为 :STQPKITVATXL DG.根椐大、小亚基 N-末端氨基酸序列设计两套引物 ,Primer1:5′g AT(g/ C) g T g AT(g/ C) g T(g/ A) Cg3′和 Primer2 :5′A g C AC(C/ g) CAg CC(C/ g) AA(g/ A) ATC3′,通过 PCR扩增获得 0 .6 kb的扩增片段 .克隆并对该片段序列进行分析 ,结果表明 ,该片段包含小亚基基因的全序列 .可溶性氢酶小亚基由 179个氨基酸残基组成 ,分子量为 2 1.8k Da,含有 Ni Fe-氢酶保守的序列框 :Cxx C......Gx Cxxx G......

摘要：根据配位催化原理和化学探针思路，推断了野生菌固氮酶在酶促固氮反应中［Ｍｏ］位直接参与结合分子氮Ｎ≡Ｎ；论证了固氮酶钼铁蛋白的Ｍ－簇（Ｋｉｍ－Ｒｅｅｓ模型）必须是活口的钼－铁－硫原子簇笼，对底物和抑制剂有分子识别能力，只有Ｎ≡Ｎ才能作为底物络合在［Ｍｏ－３Ｆｅ，３Ｆｅ］七核活性中心，而且必须有一条质子（和电子）接力传递链到达［Ｍｏ］位，Ｎ≡Ｎ才能排去氢基配体而进到［Ｍｏ］位，（否则就只能象那样结合在［６Ｆｅ］位）：此外还需要另一条质子接力传递链进到［Ｆｅ２］位才能使Ｎ≡Ｎ从外端Ｎ逐步还原加氢．其它十多种底物分子按形状和大小，只能在笼内［６Ｆｅ］应，或笼口［２Ｆｅ］位，或一部份在笼内、一部份在笼外还原加氢，这些底物只需要两条质子接力传递链中有一条不失效就行．阐明了ＣＯ不是底物而是所有外源底物酶促还原反应的抑制剂的原因．讨论了两条质子接力传递链及其支架基团的本质和进一步验证的方法．设计了一种基于其它底物或抑制剂对ＣＨ≡ＣＨ酶促还原加氘的竞争抑制来检验它们是在笼内或笼外结合的化学探针方法，并成功地用于验证高柠檬酸盐固氮酶确是在笼内强烈地抑制乙炔还原加氘（氢）的．