摘要：为了实现人乳头瘤病毒(Humanpa pillomavirus,HPV)16亚型衣壳蛋白L1在多形汉逊酵母(Hansenula polymorpha)中的高效表达,根据L1蛋白的氨基酸序列及多形汉逊酵母的密码子偏爱性,对L1蛋白的编码序列进行优化设计,合成了完整的编码序列,命名为HPV16L1。以甲醇诱导型启动子MOXp和终止子AOXTT为表达调控元件,以尿嘧啶合成相关基因URA3为筛选标记,构建了HPV16L1的重组表达质粒pYMOXU-HPV16。用SacII酶切质粒pYMOXU-HPV16使其线性化,电转化多形汉逊酵母菌株H-ura3,依据营养缺陷互补筛选重组菌株。通过PCR扩增及HPV16L1蛋白表达量分析表明已获得稳定高表达L1蛋白的重组汉逊酵母菌株HP-U-16L。摇瓶发酵条件的初步优化表明,以YPM(pH7.0)为基础培养基进行诱导培养,控制接种量使初始培养液OD600为1.0,每隔12h补加甲醇至终浓度为1%(V/V),37oC、200r/min条件下诱导培养72h后,HPV16L1蛋白的最高表达量为78.6mg/L。本研究为多形汉逊酵母源HPV16L1疫苗的研制奠定了基础。

摘要：通过筛选、单倍体分离、诱变和原生质体融合 ,从融合子中选育了一株高生物量富硒酵母菌株 (编号为ZFF_2 8) ,其细胞硒总含量分别是原始亲株ZY_6 7和ZY_198的 2 8倍和 2 0倍。通过单因素实验和正交试验设计 ,确定了优化培养条件 :6 %糖浓度的蔗糖糖蜜 ,添加 0 5 % (NH4 ) 2 SO4 、0 1%H3PO4 、6 0 μg mLSe,pH6 0～ 6 5 ,装液量5 0mL 2 5 0mL三角瓶 ,接种量 10 % ,培养时间 2 5h。在优化培养条件下 ,菌株ZFF_2 8的生物量可达 8 2g L ,细胞中硒的含量达 2 0 5 0 μg g ,硒总含量达到了 16 810 μg L ,是培养条件优化前的 1 3倍。细胞硒含量的 91%为有机硒。

摘要：为了提高酵母菌的γ-氨基丁酸产量,本研究以十六烷基三甲基溴化铵法(hexadecyl trimethy ammonium bromide,CTAB)提取的酿酒酵母28基因组DNA为模板,扩增得到序列长度为1 758 bp的GAD1基因,经比对与*** S288c的一致性达到98.58%,并设计引物扩增包括GAD1基因上游启动子及调控序列,下游终止子在内的全长基因序列,长度为3 490 bp。将全长基因序列克隆至高拷贝质粒p UG6,构建重组质粒p28。以菌株28作为出发菌株进行转化,经G418抗性筛选得到转化子,进一步经过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)实验验证,质粒提取及酶切验证,确证得到重组子DL28。经重组质粒p28的特性研究得知,重组质粒p28具有良好的遗传稳定性,无抗性传代培养10次重组质粒不丢失。转化后进行酶活力测定,重组子DL28的谷氨酸脱羧酶(glutamic acid decarboxylase,GAD)酶活力比菌株28提高73.8%。通过以上实验结果得出结论,GAD基因高表达菌株DL28具有更高的G418抗性和GAD酶活性。

摘要：[目的]筛选出对酿酒酵母重组菌转化产生γ-氨基丁酸(GABA)具有影响的主要因素。[方法]利用Plackett-Burman试验设计对谷氨酸脱羧酶基因(GAD 1)高效表达重组菌Saccharomyces cerevisiae DL28转化产GABA的主要影响因子,如菌体浓度、底物浓度、转化温度、转速、转化时间及起始pH等进行研究,筛选出主要影响因素。[结果]试验表明,菌体浓度(P=0.012 3)、转化时间(P=0.047 5)及起始pH(P=0.001 9)对转化产生GABA具有显著影响。[结论]研究可为进一步优化菌株DL28产GABA转化条件提供理论依据与实践基础。

摘要：为观察空间条件对微生物的影响,1994年在中国发射的科学返回式卫星上,首次搭载了中国自行设计的空间微生物培养箱.结果表明,所携带的微生物菌株全部存活,其形态、培养牲、遗传学特征及产物产量出现不同程度的变化:妥布拉霉素生产菌出现大量变异菌落;JZ-23-4Trp和Ade缺陷型酵母菌搭载后有15%Trp缺陷型消失;圈卷产色链霉菌产抗生素能力呈不平均分布趋势;巨大芽孢杆菌产酶活力提高11.6%;酵母菌单倍体产SOD活力提高,而二倍体没有变化.空间电泳液的搭载结果表明,它在空间能有效地抑制微生物的生长繁殖.