摘要：为了解转录因子bHLH在长白落叶松(Larix olgensis)中的功能,探究该基因在长白落叶松不同组织中及不同逆境胁迫下的表达特性,从长白落叶松根、茎和叶3个不同部位的转录组数据中获得bHLH34基因全长序列,并设计引物,克隆得到长白落叶松bHLH34基因,其完整的开放阅读框(ORF)长度为696 bp,共编码231个氨基酸。构建亚细胞定位表达载体,瞬时转化毛果杨(Populus trichocarpa)原生质体,在激光共聚焦显微镜下观察显示,LobHLH34基因定位在细胞核内。系统进化树分析结果显示,长白落叶松与云杉(Picea asperata)、卷柏(Selaginella tamariscina)树种该基因的亲缘关系较近。利用qRT-PCR技术分析了bHLH34基因在长白落叶松中的组织表达特异性和应对非生物胁迫的表达。结果表明LobHLH34基因在长白落叶松的根、茎、叶中均有表达,其中在茎部表达量最低,在叶中相对表达量最高。LobHLH34基因在NaCl、PEG和ABA处理时,不同器官中的表达量也有所不同。推测长白落叶松bHLH34基因参与了植物的生长、发育、响应逆境胁迫的过程,且在不同器官中具有特异性。

摘要：在黑龙江省宾县万人欢林场试验地,选择胡桃楸(Juglans mandshurica Maxim.)种源试验林、家系试验林为研究对象,种源试验林试验种子来自黑龙江省15个种源地(以当地试验种子为对照)、家系试验林试验种子来自14个种源的133个胡桃楸半同胞家系(以当地试验种子为对照);种源、家系试验林均于2014年秋季播种,2016年春季定植,试验采用完全随机区组设计,种源试验林为1个小区(小区9~10株,4次重复)、家系试验林为5个小区(小区8~12株,4次重复),株行距均为3 m×4 m。分别于2019、2020、2021年11月份,对5~7年生胡桃楸种源、半同胞家系试验林的树高、胸径等性状进行每木测量,利用测量的3 a树高、胸径,计算2020年连年生长量、2021年连年生长量;以树高连年生长量、胸径连年生长量、家系遗传力、变异系数、种源现实增益、家系遗传增益为评价指标,采用方差分析、布雷津多性状综合评定法,分析胡桃楸种源与家系间生长性状遗传变异规律、遴选优良种源家系。结果表明:种源各年度间大部分性状在各变异来源间差异极显著,家系各年度各性状在各变异来源间差异极显著。种源树高变异系数变化范围为21.97%~38.79%、胸径变异系数变化范围为27.99%~36.47%,家系树高变异系数变化范围为24.23%~41.54%、胸径变异系数变化范围为30.08%~45.33%。家系各年度各性状遗传力的变化范围为0.79~0.90,其中7年生树高超过了0.90。利用多性状综合评价法,以20%的入选率进行优良种源、家系选择,初步选出3个优良种源(宾县大泉子、富锦、宝清)、27个优良家系;入选的3个种源,树高的现实增益为9.75%、胸径的现实增益为13.80%、树高连年生长量的现实增益为9.54%、胸径连年生长量的现实增益为8.50%;入选的27个优良家系,树高的遗传增益为11.84%、胸径的遗传增益为14.32%、树高连年生长量的遗传增益为8.84%、胸径连年生长量的遗传增益为6.39%。对胡桃楸的生长性状综合分析表明,在胡桃楸种源和家系间均存在丰富的变异,可以进行优良种源、家系的初步筛选。

摘要：在黑龙江省苇河林业局青山种子园,以1988年黑龙江省苇河林业局营建的红松(Pinus koraiensis)自由授粉子代家系测定林为试验林,采用完全随机化区组设计,单行小区8株,5次重复,株行距1.5 m×2.0 m;以117个红松半同胞家系为研究对象(1个对照的种子来源于当地生产,其余116个家系来源于黑龙江省鹤北林业局红松天然林优树),分别测定林龄25、27、34 a的红松半同胞家系子代测定林胸径性状;采用变异分析、方差分析、多重比较、遗传参数估算、相关分析、稳定性分析及育种值估算,分析红松半同胞家系胸径性状遗传变异规律,筛选优良家系。结果表明:不同林龄时期,胸径性状存在不同程度变异,平均变异系数为21.22%,家系间胸径差异均达到极显著水平。胸径性状主要受遗传效应、遗传与环境协同效应的影响;相同年份内家系遗传力均高于单株遗传力,在不同年份早晚相关性表现为极显著正相关,遗传相关系数和表型相关系数均较大。通过稳定性分析,获得稳定性综合评价好的6个家系。对子代家系胸径性状,在不同林龄时期的生长表现进行综合分析与评价,依据34年生时胸径性状表现,以10%的入选率筛选出11个优良家系。

摘要：为了解去劣疏伐对长白落叶松初级无性系种子园遗传多样性的影响程度,利用14对SSR引物,对苇河青山长白落叶松初级无性系种子园内38个无性系,共260个亲本进行遗传多样性的研究。根据子代表现及亲本生长结实的能力,设计10%～60%的疏伐强度进行模拟疏伐,利用POPGENE3.2程序分析疏伐前后各个遗传多样性参数的变化。结果表明:种子园遗传多样性降低程度与疏伐强度呈正相关,40%以内的疏伐强度对种子园遗传多样性影响较小,减小幅度小于0.5%,能够维持种子园较广泛的遗传基础;疏伐后无性系内至少要保留7～9个单株才能维持无性系内的遗传多样性,如按照疏伐后保存率为60%推算,长白落叶松种子园建园时,每个无性系至少种植12～15株。

摘要：【目的】红松已开发的分子标记缺乏共显性的遗传标记，尚不能满足分子标记辅助育种的需要。利用转录组数据开发 SSR标记目前仍然是较为经济高效的 DNA分子标记开发策略，本研究利用高通量测序技术开发红松 EST-SSR标记，掌握其在转录组序列中的分布类型及特征，为红松的 SSR多样性分析及变异分析提供基础。【方法】利用 SSR检索程序从红松转录组41476条 Unigenes中筛选得到1757个 SSR 位点，并对 SSR 位点的数量、分布特征进行统计分析。设计合成101对 SSR引物，采用琼脂糖电泳初步检查和聚丙烯酰胺凝胶电泳分离检测方法确定引物的多态性，并收集扩增产物，送测序验证，最终开发出16对 SSR引物。合成6对荧光引物，采用荧光标记技术对来自黑龙江省鹤岗、林口、铁力、苇河4个种子园的53份自由授粉子代进行遗传多样性分析。【结果】基于转录组序列开发出的 EST-SSR的分布频率（ SSR 的个数与总 Unigene 的数量比）为4.24%。单、二、三核苷酸重复单元分别占总SSR的46.90%，17.12%和34.66%； SSR重复单元的重复次数分布在5～24次之间。参试的101对引物中有21对引物扩增可检测出多态性位点，占引物总数的20.8%；重测序验证，有16对引物能够扩增出目标序列。6对荧光引物共检测出18个等位基因，多态性信息量（PIC）为0.0363～0.6674，平均为0.325。【结论】红松属于基因组序列比较庞大的裸子植物，本研究可扩增出多态性位点的引物重复单元以二、三核苷酸重复为主。所研究红松种子园子代属于中等多态性水平。本研究印证了利用红松转录组数据开发 SSR标记的可行性，同时采用荧光标记技术检测红松自由授粉子代材料，为红松种质资源的多样性水平分析及变异水平的研究提供基础。

摘要：以兴安落叶松针叶DNA为模板,对影响落叶松RAPD-PCR扩增的重要参数进行了优化试验,以期建立兴安落叶松RAPD-PCR反应的最佳体系。通过采用正交设计L16(45)对兴安落叶松RAPD-PCR反应的5因素(Taq酶、Mg2+、dNTP、模板DNA、引物)在4个水平上进行优化试验,结果表明兴安落叶松最佳的RAPD-PCR的反应体系(20μL)中含有模板90ng,0.5μmol·L-1的引物,1×反应缓冲液,DNTP各为0.25mmol·L-1,1U的TaqDNA聚合酶,Mg2+2.5mmol·L-1。在此基础上筛选出20个扩增稳定、多态性丰富的RAPD引物,并通过梯度PCR试验,确定了引物最佳退火温度。

摘要：以长白落叶松胚性愈伤组织为材料,通过Box-Behnken Design设计试验,建立以体胚发生量为响应值的响应面模型,优化长白落叶松体胚形成早期的培养条件。结果表明:相对离子浓度(P=0.007)、肌醇浓度(P=0.000)、培养周期(P=0.000)、肌醇浓度与培养周期的交互作用(P=0.007)对长白落叶松体细胞胚胎发生量的影响极为显著。长白落叶松体胚形成早期的最适培养条件为:相对离子浓度26.767 7%BM、肌醇浓度10.454 5g·L^(-1)、培养周期12.656 6 d,预测体细胞胚胎的发生量为337.04个·g^(-1)。为便于实际操作,验证试验将培养条件调整为:离子浓度25%BM、肌醇浓度10 g·L^(-1)、培养周期13 d,体胚平均发生量为336.46个·g^(-1),与预测值336.29个·g^(-1)基本一致,体胚萌发率与生根率分别达100%和83.33±5.78%,与前期试验相比,长白落叶松体胚发生的数量和质量均有显著提高。

摘要：登陆NCBI的dbEST数据库搜索松科树种EST序列,应用SSRIT软件在线搜索EST-SSR,用Primer3设计EST-SSR引物。选用日本落叶松(***)×兴安落叶松(***)及其145个F1为检测植株,对所开发EST-SSR引物进行扩增,并以丙烯酰胺凝胶检测扩增产物,以获得适合落叶松的SSR引物,以期用于该家系的图谱构建及QTL定位的研究。NCBI数据库搜索松科EST序列40608条,使用SSRIT检测得到SSR位点1011个,频率为2.49%。使用primer 3设计EST-SSR引物132对。SSRs以二核苷酸重复最为常见,重复基元11种,重复数量5598个,占全部重复基元比例达到83.79%;其次为三核苷酸,重复基元40种,重复数量1067,占全部重复单元的比例为15.97%;四核苷酸为3种重复基元,重复数量16,所占比例为1.95%。经扩增检测125对EST-SSR引物在日×兴亲本及F中获得扩增产物,占94.7%。

摘要：【目的】以落叶松胚性系为研究对象,建立和优化适合落叶松胚性愈伤组织增殖的悬浮培养体系,在此基础上对悬浮组织进行体细胞胚的成熟诱导。旨在为实现落叶松胚性愈伤组织的快速增殖及体细胞胚的规模化繁育奠定基础。【方法】对已诱导获得的长白落叶松、兴安×日本杂种落叶松及日本×长白杂种落叶松胚性愈伤组织进行继代培养,取新鲜增殖的组织进行悬浮培养。采用L9(34)正交试验设计,以胚性愈伤组织的增殖量及增殖率为响应值对悬浮培养条件进行筛选和优化,并对选出的最适培养条件进行验证。以悬浮增殖的胚性组织进行体细胞胚成熟培养,统计体胚发生量。【结果】在落叶松胚性愈伤组织的悬浮培养过程中,接种量、震荡强度及培养时间对胚性组织增殖具有显著的影响。在一定范围内,落叶松胚性组织的增殖量及增殖率随初始接种量的增加而降低,随震荡强度的升高呈先增加后下降,而随培养周期的延长而增加。以4 g·L^(-1)接种于含2,4-D 0.15 mg·L^(-1)、6-BA 0.05 mg·L^(-1)及KT 0.05 mg·L^(-1)的BM培养基(SCM),在120 r·min^(-1)避光条件下悬浮培养,3个落叶松胚性系的胚性组织均能快速、稳定地增殖,培养15天的增殖率分别为2 569.42%、4 189.96%及3 001.67%,表现出较明显的种间差异。成熟培养方式对落叶松胚性悬浮组织的体胚发生量影响极显著(P=0.000)。悬浮培养获得的胚性组织接种到含琼脂6.0g·L^(-1)的固体增殖培养基(PCM)上继代15天后,转接到添加肌醇10 g·L^(-1)且无生长调节剂的1/4BM过渡培养基(TCM)上培养14天,再转入含有ABA 20 mg·L^(-1)、Ag NO35 mg·L^(-1)、PEG400080 g·L^(-1)的体胚成熟培养基上培养8周,体胚发生量显著提高(P=0.000)。在此条件下,3个落叶松胚性系OO-A1、GK-F1及KO-H的体胚发生量分别为(101.69±11.19)、(93.09±9.34)及(5.78±1.47)个·g^(-1)。【结论】悬浮培养能在短期内获得大量分散均匀、质量较高的落叶松胚性愈伤组织,且不会影响体细胞胚的发生和成熟。在BM液体培养基(SCM)中,接种量为4 g·L^(-1)、震荡强度为120 r·min^(-1)、暗培养15天,落叶松胚性组织的鲜质量可增加26.99~42.90倍。悬浮培养获得的胚性组织经固体增殖培养基(PCM)继代15天及过渡培养基(TCM)预培养14天后,再进行体胚成熟诱导可明显提高其体胚发生量。

摘要：以4株中国白桦优树(B1、B2、B3和B4)和1株欧洲白桦(OB)为杂交亲本,按5×5双列交配设计控制杂交,对全同胞子代的树高、胸径及材积分析表明:杂交组合子代间的树高、胸径和材积均存在着极显著的差异,各性状的一般配合力、特殊配合力和反交效应差异也达到了极显著水平。根据各杂交组合子代的生长量、一般配合力、特殊配合力、反交效应,初步选择B1为优良亲本、B4为优良母本、B3为优良父本,其中最好的B1亲本在树高、胸径和材积性状上的一般配合力分别为0.1263、1.1367、0.0091,杂种子代各性状生长量超过各组合平均值的3.37%、5.05%、12.18%;B1×B3、OB×B1、B4×B3为初选优良杂交组合,其中B1×B3各性状上的特殊配合力分别为0.0910、0.8080、0.0070,杂种子代各性状生长量超过各组合平均值的13.11%、21.21%、55.76%。该研究为白桦第二代强化种子园的亲本选配提供理论依据。