摘要：目的研究一种本室设计的B型CpG ODN(BW006)作为乙肝疫苗佐剂的可行性。方法以琼脂糖凝胶电泳法对BW006的质量进行初步检定;H3-掺入法检测BW006对小鼠脾细胞的刺激作用;乙肝疫苗与BW006联合免疫Balb/c小鼠,并用ELISA法检测小鼠血清中的HBsAb水平。结果BW006的纯度和完整性符合实验要求,并能显著的刺激小鼠脾细胞的增生,同乙肝疫苗联用后能够明显增强乙肝疫苗的免疫效果。结论BW006对乙肝疫苗有较强的免疫佐剂作用。

摘要：建立并优化犬特异性寡脱氧核苷酸(CpGODN)的体外筛选条件,筛选自行设计的对犬具有免疫刺激活性的CpGODN。用CpGODN2006对犬的免疫细胞进行刺激,测定细胞增殖能力。对免疫细胞的来源、细胞铺板浓度、CpGODN的刺激时间和浓度及增值能力的测定方法等条件进行优化。并对自行设计的CpGODN进行了初步筛选。结果显示,犬脾细胞对CpGODN的反应性比外周血单个核细胞好。在犬脾细胞为6×105个/孔,37℃5%CO2条件下,经10mg/LCpGODN2006刺激48h,使脾细胞明显增生。3H-TdR掺入法测得的结果比MTT法更敏感。自行设计的CpGODNR008能显著地刺激犬脾细胞增生,且优于CpGODN2006(P<0.05)。结果表明,优化了犬特异性CpGODN的体外筛选条件,并筛选出了对犬具有免疫刺激活性的CpGODN。

摘要：为研制安全高效的口蹄疫疫苗,设计并构建了能模拟口蹄疫病毒天然表位的重组蛋白疫苗.选取牛O型口蹄疫病毒Vp1蛋白上的B表位和T表位,将其连接组合成多种方式,利用计算机预测蛋白质的3维结构,选取其中最优的结构进行构建.在大肠杆菌表达后经镍亲和层析纯化重组蛋白.重组蛋白免疫豚鼠后,经ELISA实验检测血清中抗FMDV抗体水平.构建了牛O型口蹄疫病毒重组蛋白疫苗的结构基因,并成功表达和纯化了该重组蛋白.功能实验表明,该蛋白在豚鼠体内诱生了高水平的抗牛O型口蹄疫病毒的抗体.该重组蛋白疫苗的设计为研制牛O型口蹄疫病毒新型疫苗提供了新的思路.

摘要：目的 :探讨人酸性成纤维细胞生长因子 (acidic fibroblast growth factor,a FGF)在大肠杆菌中高效表达的方法及重组人 a FGF的生物学活性。方法 :1通过 PCR法扩增人 a FGF引入点突变 ,对其密码子进行改造 ;2构建 a FGF- p ET- 2 8a重组质粒并在大肠杆菌 BL2 1 (DE3)中表达 ;3重组蛋白的纯化及生物学活性研究。结果 :通过 PCR扩增 ,将设计的核酸水平突变引入到 a FGF DNA中 ,使其自起始密码 ATG后的前 5 0个碱基均为原核细胞偏爱密码子、并保持原氨基酸序列不变 ,成功地实现了重组人 a FGF在大肠杆菌中的高效表达 ,并通过降低培养温度使大肠杆菌中可溶性目的蛋白的含量大幅增加 ,原核表达的 a FGF亦具有天然生物学活性。结论 :通过对 a FGF DNA碱基进行改造 ,可大幅度提高 a FGF在大肠杆菌中的表达量 。

摘要：目的构建一种能预防AsiaⅠ型口蹄疫病毒(FMDV)的感染表位重组蛋白疫苗,并对其免疫学活性进行研究。方法以AsiaⅠ型FMDV VP1上的B细胞表位和T细胞表位氨基酸序列为抗原位点,设计了包含上述位点的、具有最佳空间构象的重组蛋白,命名为"CZ-1"。通过PCR及基因克隆等方法构建了其表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。通过镍亲和层析和G-25凝胶过滤层析纯化及复性,获得具有免疫学活性的重组蛋白CZ-1。免疫豚鼠获得含针对AsiaⅠ型FMDV中和抗体的血清,通过细胞中和试验及乳鼠中和试验,检测豚鼠血清中抗FMDV的保护性中和抗体滴度。结果该基因工程重组蛋白能够在动物体内诱导产生抗AsiaⅠ型FDMV具有保护性的中和性抗体。结论该基因工程重组蛋白有望开发成预防AsiaⅠ型FDMV感染的新型疫苗。