摘要：将马立克氏病病毒（ＭＤＶ）血清Ⅰ型Ｒｉｓｐｅｎｓ株和ＲＬ株分别接种于原代鸡胚成纤维细胞，待出现８０％以上细胞病变后收获，经蛋白酶Ｋ消化，酚、氯仿抽提，乙醇沉淀细胞和病毒的总ＤＮＡ（ｔｏｔａｌＤＮＡ）。以此为模板，根据已发表的Ｂ抗原基因核苷酸序列设计１对引物，通过聚合酶链式反应（ＰＣＲ）扩增出１条约２．８５ｋｂ的特异性条带，斑点杂交证实其为Ｂ抗原基因。双酶切消化后，克隆到质粒ｐＵＣ１９中。酶切分析表明，在这２株病毒的Ｂ抗原基因上，ＨｉｎｄⅢ、ＥｃｏＲＶ、ＢａｍＨＩ、ＥｃｏＲＩ的酶切位点分布与超强毒ＲＢＩＢ株、标准强毒ＧＡ株的完全相同。

摘要：根据已发表的新城疫病毒（ＮＤＶ）核衣壳蛋白（ＮＰ）基因序列，设计合成１对长度为３２ｍｅｒ的引物。ＲＴ－ＰＣＲ扩增ＮＤＶＦ４８Ｅ８株、Ｕｌｓｔｅｒ株、ＬａＳｏｔａ株的ＮＰ基因，产物经琼脂糖凝胶电泳分析，均呈现１条长１．５ｋｂ左右的特异性带。将Ｆ４８Ｅ８株扩增产物克隆入ｐＵＣ１８载体，经限制性内切酶分析证实为ＮＰ基因。

摘要：根据禽流感病毒 ( AIV)各基因片段两端保守区序列设计锚引物 ,应用 c DNA末端快速扩增法获得了 AIV分离株 A/Chicken/Shanghai/F/98( H9N2 )的血凝素 ( HA)和神经氨酸酶 ( NA)全长基因。 1 5个毒株的 HA和 NA序列比较结果表明 :F株与 Chicken/Beijing/1 /94、Duck/Hong Kong/Y2 80 /97同源率较高 ,为 94.4%～ 97.4% ,但与香港人流感病毒 Hong Kong/1 0 73 /99、Hong Kong/1 0 74/99及 Quail/Hong Kong/G1 /97同源率较低 ,为 90 .3 %～ 91 .9%。F株与 Duck/Hong Kong/Y2 80 /97的 NA基因不但同源率高达 97.4% ,而且均在 2 0 5位核苷酸之后缺失 9个核苷酸。另外 ,3 0个毒株的 HA基因 c DNA比较结果显示 ,最后

摘要：根据禽霉形体 16SrRNA的基因序列设计、合成了 1对引物 ,用这对引物对鸡毒霉形体 (Mycoplasmagallisep ticum ,MG)和鸡滑液囊霉形体 (Mycoplasmasynoviae ,MS)菌株DNA进行PCR扩增 ,得到了与预期大小相一致的约 5 80bp的PCR产物 ,而这对引物对其他禽病病原DNA或RNA模板的扩增结果为阴性。PCR方法对MG和MS的最小检出量分别为 2 pg和 3pg。应用已建立的PCR方法检测MG人工感染样品和临床样品 ,从人工感染样品中均检测到MG ,临床样品的MG阳性检出率为 10 .2 5 % 。

摘要：根据GenBank中已发表的H5亚型禽流感病毒HA基因序列 ,设计一对引物 ,通过RT PCR扩增鹅源H5亚型高致病力禽流感病毒HA基因 ,测序确认后 ,将其克隆入真核表达载体pVAX1和asd pVAX1得到重组表达载体pVAX1 HA和asd pVAX1 HA。将重组质粒转染P815细胞 ,经间接免疫荧光试验证实 ,HA基因在细胞内得到了瞬时表达。进一步将重组质粒转化减毒鼠伤寒沙门氏菌X4 5 5 0得到两种运送DNA疫苗的重组沙门氏菌X4 5 5 0 (pVAX1 HA)和X4 5 5 0 (asd pVAX1 HA) ,以 1× 10 9CFU 只的剂量两次口服免疫BALB c小鼠 ,免疫小鼠不仅可以检测到HA特异性的血清抗体应答 ,而且还能抵抗稳定表达H5亚型禽流感病毒HA基因的P815肥大细胞瘤的攻击 ,说明该运送DNA疫苗的减毒沙门氏菌系统在体内能够成功释放所携带的质粒 ,并且能够刺激机体产生保护性免疫应答。

摘要：根据沙门氏菌组氨酸转运操纵子基因序列设计引物 ,对沙门氏菌属 A～F各群中共 1 5株沙门氏菌标准菌株、2 7株沙门氏菌现场分离菌株和其他 1 0株非沙门氏菌菌株进行聚合酶链反应 (PCR)扩增 ,结果沙门氏菌均出现 495 bp特异性 DNA扩增条带 ,所有对照均未出现特异条带 ,提示这对引物具有很强的沙门氏菌属特异性。PCR敏感性试验显示 ,该体系能检出 1 4pg以上的沙门氏菌 DNA。通过对 5种不同的 DNA模板提取方法的比较 ,选择操作简便、快速、成本低廉的热裂解法。采用该方法 ,对生鲜奶样进行检测 ,经与国家标准卫生检验方法相比较 ,两者符合率达 1 0 0 %。

摘要：将马立克氏病病毒（ＭＤＶ）血清Ｉ型Ｒｉｓｐｅｎｓ株接种原代鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ），待出现８０％以上细胞病变后收获，提取细胞和病毒的总ＤＮＡ．以此为模板，根据Ｂ抗原基因核苷酸序列设计一对引物，通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增出一条约２．８５ｋｂ的特异性条带，双酶消化后克隆至质粒ｐＵＣ１９，酶切分析表明该病毒的Ｂ抗原基因上ＨｉｎｄⅢ、ＥｃｏＲⅤ、ＢａｍＨⅠ、ＥｃｏＲⅠ的酶切位点分布与ＲＢ１Ｂ株、ＧＡ株的完全相同，进一步序列分析表明。