摘要：目的:建立一种三向连接构造(three-way junction formation,3WJ)组合引物介导的滚环扩增技术(primer generation-rolling circle amplification,PG-RCA)检测肠道病毒71型(EV71)。方法 :根据EV71 VP1基因保守区设计3WJ模板T、3WJ引物P以及环状探针CP前体。对EV71进行恒温滚环扩增,检测患者咽拭子中EV71。结果:建立的新的滚环扩增技术能检测到amol级的合成RNA,检测临床标本时特异性强、敏感度好。结论:3WJ组合PG-RCA恒温滚环扩增技术检测肠EV71特异性强、敏感性好、不需昂贵的PCR荧光检测仪,便于基层医院开展。

摘要：目的建立三向连接构造(3WJ)组合引物介导的滚环扩增(PG-RCA)技术检测肠道病毒71型(EV71)的方法,并验证其检测效果。方法根据EV71的VP1基因保守区设计引物模板、引物以及环状探针前体,确立反应体系及反应条件,实时荧光PCR仪监测扩增结果。采用已建立的3WJ组合PG-RCA技术检测16例手足口病患儿咽拭子标本(EV71阳性12例、柯萨奇病毒A阳性2例、柯萨奇病毒B阳性2例)。结果已建立的3WJ组合PG-RCA技术能检测到amol级的EV71 RNA,说明方法建立成功。EV71阳性标本扩增曲线荧光强度均超过阈值;柯萨奇病毒A、B阳性标本扩增曲线荧光强度均低于阈值。结论成功建立3WJ组合PG-RCA技术检测EV71的方法,检测效果好。

摘要：【目的】利用CRISPR/Cas9技术构建Pmepa1基因敲除的TCMK1小鼠肾小管上皮细胞系,并探讨Pmepa1敲除对TGF-β刺激下TCMK1细胞纤维化的影响,为研究Pmepa1在纤维化模型中的作用提供细胞模型。【方法】根据CRISPR/Cas9设计原则设计靶向小鼠Pmepa1基因组序列的sgRNA序列,构建pX333载体并转染进入TCMK1细胞,采用流式分选m Cherry阳性细胞、单克隆细胞扩增和测序鉴定Pmepa1敲除细胞,Western blot验证Pmepa1基因敲除情况。采用RT-PCR和Western blot分析Pmepa1敲除对TGF-β1诱导的R-Smad的活化和纤维化的影响。【结果】将sgRNA设计在Pmepa1第2个外显子,pX333-Pmepa1质粒转染TCMK1细胞48 h后,观察到mCherry荧光蛋白的表达,流式细胞分析转染效率约为17%,pX333-Pmepa1质粒转染阳性细胞经流式分选和单克隆扩增培养,得到19个细胞克隆,对Pmepa1基因位点上sgRNA靶点序列PCR扩增测序分析发现2个双等位基因移码突变细胞,Western blot验证Pmepa1蛋白表达缺失,表明Pmepa1基因敲除TCMK1细胞株构建成功,与未敲除细胞相比,Pmepa1敲除细胞在TGF-β1刺激下,p-Smad2和p-Smad3的表达显著升高,并且促进纤维化基因Fibronectin和Collagen I的表达。【结论】利用CRISPR/Cas9技术成功构建Pmepa1基因敲除TCMK1小鼠肾小管上皮细胞系,为Pmepa1蛋白的功能研究建立了细胞模型以及Pmepa1在纤维化中的重要作用。

摘要：目的构建科学、规范的护理本科在线课堂教学质量评价指标体系,为提高在线教学质量和激发学生深度学习提供评价依据。方法通过Delphi法和层次分析法对15名专家进行3轮函询并确定了护理本科在线课堂教学质量评价指标体系及其权重。结果3轮专家咨询的问卷有效回收率均为100%,专家权威系数均为0.88,第3轮专家函询时,一、二、三级指标的协调系数分别为0.502、0.492、0.483(均P<0.001)。最终形成了包括一级指标6项、二级指标16项、三级指标57项的评价指标体系。一级指标权重分别为在线教学理念0.140、在线教学资源与环境0.207、在线教学内容0.241、在线教学方法0.207、在线教学态度0.077及在线教学效果0.128。结论该指标体系设计合理、层次分明,可作为护理本科在线课堂教学质量的评价框架,为护理在线教学模式变革提供依据。

摘要：目的 调研贵州省内医院药学服务现状及认知情况,为探索和开展药学服务收费提供参考。方法 通过“问卷星”网站设计调查问卷,以药师、医师/护士、患者为调研对象,并针对这3类人群设计问卷,问卷中部分题目有相应差异。问卷通过微信、丁香园等网络平台发布。结果 调研共发放正式问卷655份,回收有效问卷639份,有效回收率97.56%。被调查者中药师324名(50.70%),医师和护士82名(12.83%),患者233名(36.46%),这3类人群对药学服务收费的赞同度均值分别为4.67、4.23、4.22分(满分为5分)。结论 总体上药师的专业服务受到了来自医护人员及患者的支持,但目前患者所接触的药学服务项目仍以调剂服务为主,医护人员和患者对药学服务的认识有待提高,可通过提升药师队伍专业能力、加强宣传和引导、探索“互联网+药学服务”等方面提高药师工作的认可度、公众对药学服务的知晓率,以促进药学服务的持续发展。

摘要：北宋儒家伦理强势复归,艺术理论亦与儒家伦理道德结伴,参与了北宋文化的整体建构。对“艺”“道”内涵的形而上把握和基于现实境遇的时代重构,以及对“艺”“道”关系的深度思考是北宋艺术伦理思想的重要内容。在“艺”“道”关系的理解上,北宋古文士人群体与理学士人群体观点殊异,前者主张“艺道皆重”,后者则“重道轻艺”,其终极旨趣在于践行于艺术伦理之善,实现现实人格之美。北宋士人将“道”文化融浸于艺术,不仅丰富了中国艺术精神的内蕴,对当代艺术亦具有重要的价值启迪作用;对其进行挖掘、整理与研究,不仅可以加深对中国古代艺术的深度思考,亦可以启迪今人对艺术伦理问题的策略之思。

摘要：定量评价已是体育赛事社会影响评价的发展趋势,但目前在测量和评价两个方面都存在着一定困境。针对这两个研究困境,分别提出:在测量中采用“维度模块结构设计”以统一不同类型体育赛事社会影响的测量标准,并构建维度模块化结构的体育赛事社会影响评价指标体系和测量量表;在评价中采用“居民感知法+模糊综合评价法”,并以建立的测量量表为基础,举例说明如何采用“居民感知法+模糊综合评价法”对体育赛事社会影响进行定量评价。

摘要：智能制造是实现钢铁工业转型升级高质量发展的重要引擎,充分利用工业互联网架构、超融合数据平台、云存储等信息技术与钢铁制造流程深度融合,优化钢铁制造流程结构,保障全流程运行过程中的智能化控制,提升炼铁管理水平。兴澄特钢铁前通过建立全流程远程智控中心,按“集成、远程、绿色、开放、智能、共享”的设计理念,提升岗位协同水平,实现产线联动,建成“本质安全中心、远程智慧控制中心、中特一业多地铁前控制中心、铁前诊断与决策中心”四中心于一体的集控模式,提升铁前生产整体管控水平,提升员工幸福感,提升本质安全。通过协同由单点最优向整体最优逐步发展。

摘要：该文分析了传感器网络多径路由在不同模型和条件下数据包成功交付率,以及整个系统节点的能耗总量和能耗均衡,将最优节点间距的配置方案引入到多路径网络模型,并根据随机线性网络编码技术设计基于网络编码的多路径路由模型。理论分析和仿真实验证明,使用了网络编码技术的多径传输模型能够更好地保证数据传输可靠度,同时最优节点间距配置方案均衡并减少了网络中节点的能量消耗,延长了网络寿命。

摘要：通过对城市供水系统优化运行理论的深入研究,综合运用多种系统方法和计算机技术,开发了城市供水系统决策支持系统。首先按照城市供水系统运行的内容和流程设计出该系统的总体结构和框架。在此基础上,采用Delphi和Matlab等编程工具,结合数据库技术,通过多种接口设计方法实现了供水系统优化运行的数据、模型、算法等的有机结合。最后,通过实例验证,表明该系统功能比较强大,操作简便,具有较强的实用价值,能够提高供水企业的工作效率和决策水平。