摘要：用三苯甲基巯基乙醇与氯化甲氧基吗啡啉亚磷酰胺连接得到一种亚磷酰胺试剂 ( III)。用该试剂通过固相合成仪合成了 5′末端巯烷基修饰的寡核苷酸 ,用 Ag+ 脱去巯基的三苯甲基保护后与 ω-碘己基修饰的荧光基团反应 ,得到相应的荧光标记寡核苷酸探针。设计的 lmb H筛选探针与质粒 DNA进行杂交 ,杂交结果验证了这种标记的实用性 ,灵敏度可达 1

摘要：近来有关放线菌次级产物生物合成的分子遗传学和生物化学方面的进展为我们改造其代谢途径提供了一个明确的方向。近年来，对微生物的初级代谢途径进行基因改造取得了成功，但放线菌的次级代谢工程产物却都没有达到中试或生产规模。进展如此缓慢的主要原因是放线菌自身复杂的代谢途径以及细胞循环中复杂的调节方式及其特异性。目前人们着力于通过基因操作改造酶，从而重新设计以其催化产物为基本骨架的代谢途径，最终产生修饰的或新的天然终产物。本文将讨论达到此目的的几种设计策略。

摘要：以 GC含量高达 74%的带小棒链霉菌 ( ***)染色体 DNA为模板 ,从引物设计、退火温度、有机辅剂及 DNA聚合酶等方面改善 PCR反应体系和扩增条件 ,成功地克隆得到了异青霉素异构酶的 cef D基因。改进后的 PCR体系中 φDMSO=0 .0 5并加入适量的 Taq DNA聚合酶 ,退火温度比常规选择高一些 ,从而克服了常规 PCR法扩增链霉菌基因遇到的二级结构复杂、引物与模板难以配对及引物间和引物内部易形成碱基配对等问题。改进后的 PCR法提高了链霉菌基因克隆的效率 ,也可以广泛应用于高

摘要：【目的】研究bagremycin产生菌链霉菌Tü4128中编码酪氨酸酶样铜酶的bagZH基因的功能。【方法】基于同源重组技术敲除bagZH基因,利用HPLC和LC-ESI-MS分析其次级代谢产物谱。在E. coli BL21(DE3)中异源表达BagH并分离纯化,分别以邻氨基酚和3,4-AHBA为底物,利用LC-ESI-MS分析BagH催化产物。【结果】HPLC显示,bagZH基因敲除突变株的bagremycin产量显著降低,回补bagZH基因表达盒后bagremycin产量有所上调。LC-ESI-MS分析bagZH基因敲除突变株的次级代谢产物谱,结果显示,保留时间为3.18 min的新产物分子量为286.32 g/mol,与推测的3,4-AHBA在体内酯化合成的产物分子量吻合。体外生化分析显示,BagH能将邻氨基酚的邻位氨基氧化为亚硝基(保护基团)。【结论】本文首次鉴定了bagZH基因编码的酪氨酸酶样铜酶参与bagremycin生物合成。BagH负责将3,4-AHBA的邻位氨基氧化为亚硝基(保护基团)避免自身酯化,待与反式对香豆酸衍生物缩合后,再由胞内的还原酶将保护性亚硝基还原为氨基,最终合成bagremycin A和bagremycin B。我们的研究结果为bagremycin作用机制的深入研究以及高产菌株的理性设计与改造提供了基础和参考。

摘要：采用SOE-PCR技术,设计合成hLF18-40的编码基因;以融合表达策略构建了pET-43.1a-hLF18-40表达质粒,并获得较高的可溶融合蛋白表达;将融合蛋白Nus-hLF18-40进行Ni2+柱亲和层析、除盐、浓缩后,用肠激酶切割释放抗菌肽hLF18-40,为今后基因工程法表达人乳铁蛋白肽提供了依据。同时,将hLF18-40的C末端氨基酸逐一缩短直至hLF18-32,用化学法合成hLF18-40、hLF18-39、hLF18-38、hLF18-37、hLF18-36、hLF18-35、hLF18-34、hLF18-33和hLF18-32等9条肽,采用肉汤微量稀释法分别测定其最小抑菌浓度(MIC),结果发现:hLF18-40的MIC为40μmol.L-1,hLF18-39的MIC略微下降(20～40μmol.L-1),hLF18-35的MIC与hLF18-40的相同。

摘要：代谢工程 (MetabolicEngineering) ,亦称途径工程 (PathwayEngineering)和代谢设计 (MetabolicDesign) ,是一门利用分子生物学原理系统分析细胞代谢网络、并通过DNA重组技术合理设计细胞代谢途径及遗传修饰 ,进而完成细胞特性改造的应用性学科。鉴于它涉及到多基因的联合协同表达控制机制 ,与传统的蛋白多肽单基因表达 (第一代基因工程 )以及基因定向突变 (第二代基因工程 )已有显著区别 ,故作者将之看作为第三代基因工程。

摘要：为构建活性表达重组猪源抗菌肽Cecropin P1的酵母基因工程菌,采用重叠区基因扩增拼接法设计并合成其编码基因,分别载入分泌型表达载体pPICZαB和pGAPZαA中,酶切线性化后电穿孔导入酵母细胞进行整合,经高拷贝整合子筛选以及表型筛选获得高效表达抗菌肽的重组菌株,经培养条件优化确定摇瓶发酵抗菌肽的最佳收获时间,据活性测定的结果获得能表达有活性抗菌肽的重组菌,为饲用抗菌肽Cecropin P1生产工艺的建立奠定了基础。

摘要：本文介绍一种基因工程大型综合性教学实验系统的开发和应用。该实验系统由16个单元操作组成,以大肠杆菌染色体DNA为起始材料,最终获得纯净的重组碱性磷酸单酯酶基因工程产物。各单元操作均设有“建议模式”,但鼓励学生在实验条件允许的范围内自行创新设计实验操作流程。同时,还建立了相应的实验评价系统。

摘要：目的研究pEIB1复制区域的最小化。方法分析已获得的pEIB1复制区域,设计了7种亚克隆方案。结果在7种亚克隆方案中仅pEIB8,pEIB9和pEIB73获得成功,并且3者的复制特性有差别。结论分析pEIB8, pEIB9和pEIB73携带的复制片段的差别,发现pEIB1复制区域1～360 bp存在的4个质粒复制蛋白结合位点(iteron)与质粒复制拷贝数的控制关系密切。

摘要：如何在高校不断扩招及现今"厚基础、宽口径"的教育模式下培养生物科学类专业学术型、创新型优秀本科人才?本项目以大学生创新项目为平台,确立了本科创新人才培养的内涵和多元组织形式,以学生兴趣为切入点,以科学研究思路为导向,将创新实验模块与学术型人才培养模式有效融合,以激发学生创新热情,充分发挥学生个性化的"设计与学习"能力,从根本上扭转传统教学模式中仅以教师为主的教学过程,从而适应21世纪生命科学的飞速发展对学术型优秀人才的迫切需求,向社会输送具有原创研究开发能力的新型生物科学专业人才。