摘要：目的·评估双光子活体成像技术在缺血性脑卒中超早期血脑屏障(blood brain barrier,BBB)损伤的检测效果。方法·取8~12周龄的清洁级C57BL/6健康雄性小鼠12只,随机分为假手术组(Sham组)和大脑中动脉阻塞(middl ecerebral artery occlusion,MCAO)组,每组6只。MCAO组小鼠采用微线栓阻塞大脑中动脉60min,引发小鼠发生缺血性脑卒中(即建立MCAO模型);Sham组小鼠进行与MCAO组小鼠相同的所有手术操作,但不置入微线栓。当MCAO组小鼠缺血60min后,拔除线栓给予再灌注30~60min。随后,2组小鼠均行静脉注射荧光素488偶联的右旋糖苷(Alexa-Fluora-488conjugated dextran)和罗丹明6G(rhodamine 6G),分别标记血管和中性粒细胞,并采用四甲基罗丹明-5-马来酰亚胺(tetramethylrhodamine-5-maleimide,TMR)检测BBB的完整性。采用双光子荧光显微镜观察MCAO组小鼠脑卒中前、后脑血管内外荧光强度的实时变化。结果·与发生脑卒中前相比,MCAO组小鼠脑卒中发生后30~60min即可观察到脑血管外TMR荧光强度显著增强(P=0.000),提示发生了示踪剂渗漏。与Sham组相比,MCAO组小鼠发生脑卒中后中性粒细胞在血管内运动速度明显减慢(P=0.000)。结论·双光子活体成像技术可对缺血性脑卒中超早期的BBB损伤进行检测,为临床应用提供了一定的参考价值。