摘要：1 -氨基环丙烷 - 1-羧酸 (ACC)氧化酶是植物乙烯合成的一个关键酶 ,乙烯作为一种内源激素 ,对植物生长、老熟过程有多方面的调节作用。根据报道的各种植物ACC氧化酶氨基酸序列上前后两个保守区设计两个简并引物 ,以甘蔗总DNA为模板 ,通过PCR扩增到一个 940bp的基因片段。将片段序列在NCBI的BLAST软件上进行同源性搜寻 ,显示的 63个序列全部是ACC氧化酶基因 ,因而认为克隆到的片段就是甘蔗ACC氧化酶基因的一个成员。经对不同植物来源的ACC氧化酶基因家族进行比较分析 ,去除一个 10 3bp的“内含子”后 ,推导的氨基酸序列为 2 79个残基 ,占推测全长氨基酸残基总数的 86%左右。经同源性分析 ,序列与毛竹和水稻ACC氧化酶的同源率达到 86%。系统进化分析表明 ,该序列最先与水稻、其次和香蕉的ACC氧化酶聚类 ,然后再与双子叶植物的ACC氧化酶聚类 ,符合按形态特征分类的血缘关系。基因的获得对下一步了解乙烯的合成表达与甘蔗生长。

摘要：以康乃馨 (DianthuscaryophyllusL .)花瓣为材料 ,用改进的异硫氰酸胍一步法提取总RNA ,根据已报道的康乃馨ACC氧化酶 (1 aminocyclopropane 1 carboxylicacidoxidase ,ACO)基因的序列设计并合成一对引物 ,通过RT PCR方法获得一约 1 2kb特异片段 ,把该片段连接到pGEM(R) Teasyvector上进行测序 ,其全长共 115 6bp ,编码区 915bp ,共编码 30 4个氨基酸残基。序列分析结果表明该序列与GenBankL35 15 2中的康乃馨ACC氧化酶基因的cDNA序列完全相符 ,推断该基因在康乃馨种内可能是完全或高度保守的。随后将此片段反向插入植物表达载体pBI12 1的 35S启动子和NOS终止子之间 ,构建了一反义植物表达载体pBO ;又把花特异表达启动子PchsA插入pBI12 1的HindIII +Xbal位点构建中间载体pCHB ,再把康乃馨ACC氧化酶基因反向插入中间载体pCHB的XbaI +Sst1位点构建成另一反义植物表达载体pCBO。

摘要：以康乃馨(DianthuscaryophyllusL.)花瓣为材料,用改进的异硫氰酸胍一步法提取总RNA,根据已报道的康乃馨ACC氧化酶(1-aminocyclopropane-1-carboxylicacidoxidase,ACO)基因的序列设计并合成一对引物,通过RT-PCR方法获得一约1.2kb特异片段,把该片段连接到PGEM-Teasyvector上进行测序,其全长共1156bp,编码区915bp,共编码304个氨基酸残基。序列分析结果表明该序列与国外SavinKw报道的康乃馨ACC氧化酶基因的cDNA序列完全相符。推断该基因在康乃馨种内可能是完全或高度保守的。

摘要：【目的】建立一种快速、灵敏、特异的检测甘蔗条点病毒(sugarcane striate virus,SStrV)的SYBR Green I荧光定量PCR方法。【方法】从SStrV基因组保守区域序列设计特异性扩增引物,构建含有SStrV基因组序列的重组质粒pMD19-T-SStrV-qN作为阳性质粒标准品,以其为模板建立SStrV荧光定量PCR检测方法,并对该方法的灵敏性、特异性、稳定性进行了测试,随后用该方法对甘蔗不同组织部位中SStrV载量进行检测。【结果】将含有SStrV基因组序列的重组质粒按10倍比稀释成标准品,将其作为模板进行荧光定量PCR,获得标准曲线y=-3.337 x+38.197,相关系数r2=0.999,说明Cq值与标准品浓度拷贝数的对数呈线性关系;建立的荧光定量PCR最低可以检测到13拷贝重组质粒/μL,是普通PCR灵敏度的100倍。该方法能特异的检测SStrV,特异性高,组内和组间的变异系数在0.13%-0.94%之间,表明该方法重复性良好。SStrV的载量在甘蔗的不同组织部位中差异较大,+4叶中SStrV的载量最高,与其他组织部位达到了显著差异。【结论】建立了能灵敏特异检测SStrV的SYBR Green I荧光定量PCR方法,明确了+4叶是甘蔗中SStrV检测的最佳采样部位。

摘要：根据GenBank中报道的茄属植物矮牵牛花青素wd40类转录激活基因an11及番茄wd40基因113964R的mRNA序列的保守区结构,设计简并引物,从紫色马铃薯皮中克隆了马铃薯wd40类转录激活基因的保守片段,再利用RACE技术分别获得了该基因的3′端和5′端。序列分析表明,该基因核苷酸序列为1292bp,具有完整的编码框,推导其编码362个氨基酸,命名为stwd40。推测的氨基酸序列与GenBank数据库中大量物种的花青素转录激活蛋白wd40有较高的同源性,其中与矮牵牛花青素转录调控基因an11的相似性达86%。RT-PCR表达分析显示stwd40在紫色马铃薯叶、茎、皮、肉及根中都有表达,其中在茎中的表达量最高,肉中表达量最低;其在白色马铃薯的叶、皮和肉中也有表达,推测该基因为组成型表达。

摘要：根据报道的大肠杆菌 (Escherichia coli)海藻糖 6磷酸合酶基因 (ots A) ,设计引物 ,通过 PCR技术从大肠杆菌 XLI菌株的总 DNA中扩增到一个 1 .4kb的片段。经克隆、测序分析 ,该片段长 1 42 5 bp并含一完整的开放读框 (ORF)。在核苷酸水平上 ,该 ORF与已报道的 ots A基因具有 99.86%的同源性。在氨基酸水平上 ,其推断性的编码产物蛋白与 Ots A具有 1 0 0

摘要：通过NCBI公布的同源物种设计特异性引物克隆出甘蔗己糖转运蛋白基因Sh HXT6。该基因c DNA长1 929 bp,其开放阅读框编码490个氨基酸。蛋白分子量为53.87 k D,理论等电点为9.44。该基因编码的氨基酸与玉米、狗尾草和水稻的己糖转运蛋白的一致性分别为80.85%、76.89%和72.86%等。系统进化树分析表明,Sh HXT6氨基酸与玉米HXT6蛋白一致性非常相近。Sh HXT6在未成熟组织中表达较高,尤其是未成熟叶,在根中几乎不表达。构建该基因的瞬时表达载体,通过农杆菌注射洋葱表皮的方法对Sh HXT6编码的蛋白进行亚细胞定位,结果表明,该基因编码的蛋白定位于细胞膜。

摘要：为提高甘蔗抗病性,本研究根据甘蔗黄叶病毒海南分离物ScYLV-CHN-HN1全基因组序列(GenBank ***342888),利用病毒CP蛋白介导的RNAi技术,针对病毒外壳蛋白CP,设计两对含有酶切位点的特异性引物,CPsf1/CPsr1和CPasf1/CPasr1,以构建好的pMD19-T/CP质粒为模板,pRNAi1017为中间载体,分别合成构建干扰载体的正反向片段pRNAi-CP-F-R,将CP正反向片段分别插入表达载体pCAMBIA2300的相应位置,构建含有发卡结构的RNAi载体p2300-CP-F-R,经过PstⅠ酶切鉴定,证明载体构建成功。通过农杆菌介导的方法,以干扰表达载体p2300-CP-F-R转化烟草,经过PCR检测,得到12株阳性转基因植株,Southern blot杂交和半定量RT-PCR对其检测,证明干扰片段已经整合烟草基因组中并进行了转录,该结果为RNAi介导抗病毒甘蔗育种研究奠定基础。

摘要：根据Genbank公布的菊芋1-SST基因序列设计并合成特异引物FP1、FP2。提取菊芋RNA并进行反转录,克隆蔗糖:蔗糖果糖基转移酶(1-SST)基因,测序结果表明与菊芋1-SST的序列同源性达到100%。将在茎杆中特异高表达的连接有转运肽序列的番茄rbcS启动子和1-SST基因连接到载体pCBI上,成功构建植物表达载体pCBISR,并导入根癌农杆菌EHA105菌株。

摘要：根据本实验室克隆的甘蔗锌指蛋白ShZP基因cDNA序列,在开放阅读框两侧设计特异引物,通过PCR扩增引入相应的酶切位点,把甘蔗ShZP基因的编码区(大小为725bp)cDNA片段,分别以正向和反向插入到中间载体pCRBI的Prd29A启动子和NOS终止子之间,构建了其正义植物表达载体pCRBIShZP和反义表达载体pCRBIantiShZP。采用冻融法分别将pCRBIShZP和pCRBIantiShZP导入根瘤农杆菌菌株EHA105中,通过农杆菌介导法对烟草进行转化,经过12mg/L的PPT连续抗性筛选,共获得23株抗性植株,对其中的5株转正义基因烟草植株和9株转反义基因烟草植株进行PCR检测,分别获得3株转正义基因的阳性植株和4株转反义基因的阳性植株。PCR检测结果初步证明外源甘蔗锌指蛋白ShZP基因已成功整合到烟草基因组中,这一研究为植物抗逆基因工程研究打下了一定的基础。