摘要：目的：研究鉴定人脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶单克隆抗体（hAPE1 mAb）的抗原表位,并建立定量检测hAPE1的ELISA一步法。方法：设计并合成APE1-15肽阵列,鉴定hAPE1 mAb 2-G1和4-F6的抗原表位,应用三维立体结构观察软件***-Pro模拟hAPE1 mAb抗原表位的立体结构;采用改良的过碘酸钠法标记抗体,以hAPE1 mAb为捕获抗体和酶标抗体,建立hAPE1的ELISA一步检测法。结果：APE1-15肽阵列检测结果和抗原表位三维结构显示,2-G1mAb的抗原表位对应为hAPE1天然蛋白氨基酸残基序列的76-90位和109-123位,位于氧化还原区域,为构象型抗原表位;4-F6 mAb的抗原表位对应为hAPE1天然蛋白氨基酸序列的109-147位,位于DNA修复内切酶活性区。ELISA一步法检测hAPE1蛋白的线性范围为8.0~200μg/L,最低检测限为2.0μg/L。平均批内变异系数为8.67%,平均批间变异系数为12.45%,平均回收率为105.47%。结论：hAPE1 2-G1 mAb和4-F6 mAb具有不同的抗原表位,成功建立的hAPE1 ELISA一步法为简便、快速、准确检测血清中hAPE1的含量奠定了基础。

摘要：目的 构建DNA损伤修复基因脱嘌呤／脱嘧啶核酸内切酶APE1 siRNA表达载体pSilence APE1，观察其对骨肉瘤细胞HOS和9901APE1蛋白表达的抑制作用。方法 设计合成APE1 siRNA cDNA序列与线性化pSilence2．0．U6质粒连接后构建APE1 siRNA表达载体pSilence APE1，经酶切鉴定和测序确认。应用免疫组化检测骨肉瘤细胞APE1蛋白的表达，同时应用免疫印迹检测其对APE1基因的敲低作用的量效和时效关系。结果 通过双酶切鉴定和测序分析，成功构建了APE1 siRNA表达载体。免疫组化和免疫印迹证实pSilence APE1对骨肉瘤细胞APE1基因具有特异性“敲低”作用，其抑制APE1基因表达效率为72%-95％，而且其抑制作用以3.0μg pSilence APE1转染第3天最为显著。结论 成功构建了APE1 siRNA表达载体pSilence APE1 ，并且该载体能有效地敲低骨肉瘤细胞APE1基因表达。