摘要：近年来,番鸭细小病毒出现新的流行趋势,估计与病毒基因变异有关,因此针对新流行毒株研发新的检测方法很有必要。本研究根据番鸭细小病毒(MDPV)2012年分离株SAAS-SHNH的全基因序列,设计了一对特异性引物,利用PCR技术扩增全长vp3基因,经鉴定正确后,进行同源性比对分析,同时将其克隆到PET28a载体,构建成PET28a-VP3原核表达载体,经转化及IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳和Western blotting分析,表达出与预期大小相符的63.1 k Da的蛋白,该蛋白可与临床采集的免疫过MDPV的番鸭血清结合,说明该蛋白可用于MDPV的血清学检测。将纯化后蛋白免疫新西兰大白兔,制备兔源MDPV-VP3蛋白的多克隆抗体,制备的兔源血清能够与MDPV疫苗弱毒株及J3D6株VP3蛋白发生特异结合;MDPV感染原代鸭胚成纤维细胞(DEF)后,利用兔源血清作为一抗进行免疫荧光分析(IFA)分析,在DEF细胞核和细胞质内均能检测到VP3蛋白,表明利用VP3蛋白制备的抗血清可以用于MDPV免疫荧光分析细胞增殖病毒的检测。这为今后MDPV的快速检测提供了技术基础。

摘要：为了克隆苏钟猪的血管紧张素转化酶2(ACE2)基因,根据GenBank发表的ACE2基因序列,设计合成1对引物,从苏钟猪心脏提取总RNA,对ACE2基因进行RT-PCR扩增并测序,然后利用DNAstar软件对序列进行比对分析。产物经琼脂糖电泳分析,呈现1条约641 bp的条带,回收纯化后对扩增的猪心肌ACE2 mRNA进行了测序和比较分析。扩增的猪ACE2核苷酸序列与GenBank中已登录的2只猪ACE2核苷酸序列同源性分别为98.6%和99.2%。同时,利用DNAstar将其与人、牛、大鼠和小鼠等物种相应序列进行比较,结果表明苏钟猪ACE2基因与牛同源性最高,达到87.5%;与人的同源性为82.5%,与斑马鱼的同源性最低,仅为52.3%。对由苏钟猪ACE2基因核苷酸序列推导的氨基酸序列进行同源性比较也得到了同样的结果。

摘要：采用双向电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)结合MAIDI-TOF/TOF质谱方法分析不同精粗比日粮条件下肝脏蛋白/酶表达谱的差异,探讨不同精粗比日粮条件下肝脏糖脂代谢与乳脂肪合成的关系及可能机制。8只健康的泌乳中期山羊随机分为2组,日粮精粗比分别为4∶6(低精料)和6∶4(高精料),采用2×2拉丁方设计,2次重复。取乳样,测定产奶量和乳中甘油三酯(TG)的含量,并进行活体肝脏穿刺取样,应用双向电泳技术对肝脏样品进行蛋白表达谱分析。试验结果表明:与低精料组相比,高精料组山羊日平均产奶量显著增高(P<0.05),而乳中TG含量显著降低(P<0.05)。经PDQuest 7.1软件分析和MAIDI-TOF/TOF质谱分析发现在两种日粮模式下表达量存在3倍以上差异的蛋白点有34个,其中15个得到鉴定。被鉴定的蛋白主要涉及物质代谢和能量转移。其中,当精料比例提高时,脂肪分解代谢的关键酶脂酰CoA合成酶(ACS)和细胞色素b5的表达上调;糖异生作用的关键酶磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(PEPCK)表达下调,参与糖分解代谢的烯醇化酶的表达上调。结论:饲喂高精料日粮,产奶量增加而乳中TG含量降低,其机制可能与肝脏中糖脂分解代谢加强,糖异生作用受阻,竞争消耗了乳腺TG合成前体物有关。

摘要：[目的]血管紧张素转换酶2（ACE2）是RAS系统的关键调控酶,在动物上的研究较少,本试验研究了山羊ACE2的相关理化性质和功能。[方法]利用同源克隆及RT-PCR技术,根据牛的ACE2基因mRNA序列设计引物,从山羊肾脏组织中扩增出ACE2基因编码区的特异性片段,TA克隆到p MD19-T载体并转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,对生长出的单菌落进行验证后测序分析。根据测序分析结果设计引物,经PCR扩增和酶切连接,构建原核表达载体p ET-28a-ACE2,经过验证后转化大肠杆菌BL21（DE3）并用IPTG诱导表达ACE2蛋白。[结果]山羊ACE2基因c DNA编码区共包括2 415个核苷酸,编码804个氨基酸残基。同源性比对发现,山羊ACE2基因核苷酸序列同源性与绵羊ACE2最高,为99%,与斑马鱼最低,仅为60%。遗传进化分析也表明该ACE2基因与绵羊的遗传距离最近,与斑马鱼处在两个不同的分支上。蛋白结构及理化性质分析预测该山羊ACE2蛋白属于稳定型蛋白,蛋白信号肽序列位于第1氨基酸（aa）~18氨基酸（aa）之间,蛋白跨膜螺旋预测为Ⅰ型跨膜蛋白。成功构建山羊ACE2蛋白胞外部分（19~738 aa）表达载体,表达出的蛋白相对分子质量约为90×10^3,主要以包涵体的形式在BL21（DE3）中表达。[结论]本试验首次成功克隆了山羊ACE2基因编码区（基因序列号：KF921008.1）,并对其蛋白结构及理化性质进行了初步预测,同时在大肠杆菌中高效表达了其胞外区蛋白。

摘要：目的观察灵芝孢子粉对小鼠的抗疲劳作用并探讨其生化机制。方法 80只SPF级ICR小白鼠,按体质量随机分为对照组和灵芝孢子粉高剂量(500mg/kg)、中剂量(300mg/kg)、低剂量(100mg/kg)实验组,每组20只,雌雄各半。根据小鼠体质量和实验设计的剂量,每只小鼠按0.2 ml/10g的灌胃量于每天上午灌胃灵芝孢子粉溶液一次。实验周期为30d。末次灌胃30 min后,小鼠在30℃的温水浴中进行负重游泳实验;剖杀后采集小鼠肝脏和后腿肌肉组织,检测肝糖原和肌糖原含量,同时采集小鼠血清,检测血清中葡萄糖、尿素氮含量和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)、和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, AKP)等酶活性。结果灌胃不同剂量灵芝孢子粉30d后,各组小鼠的游泳时间明显长于对照组,高剂量组雌、雄鼠差异显著(5.53±1.44、16.90±5.98和10.65±1.26、20.61±3.31),分别提高了205.6%和93.5%;与对照组相比,三个剂量组小鼠肝糖原含量均显著升高(P0.05)。各剂量组小鼠血糖含量都高于对照组,且对照组与高剂量组差异显著(1.43±0.03、2.94±0.11,1.78±0.04、2.75±0.07,P<0.05);各剂量组小鼠血清尿素氮含量低于对照组。灌胃灵芝孢子粉各剂量组雌鼠血清中AKP活性均低于对照组,且在高剂量组显著或极显著降低(P<0.05,P<0.01)。与对照组相比,各剂量组小鼠血清LDH活性显著或极显著升高(P<0.05、P<0.01)。结论灌胃灵芝孢子粉可以延长小鼠游泳时间,提高小鼠抗疲劳能力。其生化特点表现在:一方面通过增加小鼠肝脏和肌肉中糖原的积累,提高了小鼠的能量储备;另一方面通过减缓尿素氮的累积和血糖水平的下降,使机体对负荷的适应性增强。

摘要：8只健康的泌乳中期山羊(Capra hircus),随机分为两组,日粮精粗比分别为4∶6(低精料组)和6∶4(高精料组),采用2×2拉丁方设计,2次重复取乳样,测定产奶量和乳中蛋白质含量.肝脏活体穿刺取样,二维凝胶电泳结合MAIDI-TOF-TOF质谱的方法分析肝脏内蛋白质代谢相关蛋白/酶表达的差异.结果:与低精料组相比,高精料组山羊日平均产奶量显著增高(0.05).肝脏蛋白组学结果表明,当精料比例提高时,肝脏参与蛋白质代谢的延长因子-Tu、谷氨酸脱氢酶、腺苷高半胱氨酸酶上调;而26S蛋白酶体调节亚基7和血清前白蛋白下调,即肝脏本身合成血清前白蛋白和小肽能力下降;同时氨基酸分解代谢和抗氧化应激作用加强.高精料饲喂泌乳期山羊,其肝脏中氨基酸消耗增多,同时小肽合成减少,竞争消耗了乳蛋白合成的原料,可能不利于乳蛋白的合成.。对高精料饲喂对内源性GH催乳效应和乳产量的影响及其机制初步探讨结果发现:与低精料组相比,高精料组泌奶山羊血液中GH、IGF-1含量均降低,乳中乳糖、乳产量下降,乳腺中IGF-1R m RNA表达下调。证明,长期饲喂高精料日粮,可导致内源性GH含量下降,IGF-1生成减少,乳产量下降。GH-IGF-1-IGF-1R轴活性抑制使其机制之一。

摘要：[目的]探究高精料日粮饲喂条件下,干奶期奶山羊肝脏中氨基酸的分配变化及其可能机制,为干奶期奶山羊的科学饲养管理提供理论基础。[方法]选用干奶期奶山羊12只,2×2拉丁方试验设计。前10 d为适应期,期间安装瘤胃瘘管并进行肝脏多血管瘘手术。适应期后,随机分为2组,分别饲喂精粗比为40∶60(对照组)和60∶40(高精料组)日粮,每期4周。每期试验结束,采集颈静脉、肝门静脉和肝静脉血液,采集饲喂后0、1、2、4、6、8和10 h的瘤胃液,采集肝脏组织。检测瘤胃液p H值,检测进出肝脏血液和肝脏组织匀浆液中FAA的含量及外周血液中脂多糖(LPS)和丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性,并检测肝脏组织中CK、LDH、ALT和AST酶活性。[结果]与对照组相比,高精料组瘤胃p H值降低,并出现亚急性瘤胃酸中毒(SARA);高精料组奶山羊肝门静脉血中FAA含量升高,而肝静脉血中FAA含量降低。肝脏组织匀浆中FAA含量降低;颈静脉血液中LPS含量极显著升高(P0.05),CK酶活性升高(P>0.05),LDH酶活性极显著升高(P0.05)。[结论]高精料饲喂,导致干奶期奶山羊肝脏中AA进肝多而出肝少,肝脏组织中储存的AA减少,AA发生重分配。其机制可能是在高精料日粮饲喂条件下,机体出现SARA,引起循环血液中LPS含量增加,激活机体的氧化应激,同时肝脏受到一定程度的损伤,共同导致肝脏中AA消耗增多。

摘要：为了实时了解鸡舍中鸡的健康状况,预防疫病的发生,设计出一种基于无线传感网络的哨兵鸡体温监测系统。基于DS18B20温度传感器和ESP8266无线通信模块设计了一款用于鸡舍内鸡只健康检测的哨兵鸡体温实时检测系统。系统中的体温监测节点采用ESP8266-12F为主控芯片,DS18B20温度传感器进行哨兵鸡翼下无毛区的体温监测,装置将采集到的体温数据实时发送到网关节点,在发送成功后进入深度休眠,网关转发数据到阿里云服务器并储存在数据库中,同时微信小程序读取数据库信息并进行显示,系统报警节点采用声光报警的方式,在接收到服务器信息后实时处理,并在发现问题后进行报警。结果表明,该系统能够有效地监测哨兵鸡的体温,并实现低功耗工作,且装置无线传输距离达到60 m,可以满足鸡舍无线通信的要求。基于无线传感网络的哨兵鸡体温实时监测系统运行稳定,功能完备,能够实现低功耗、低成本的特点,在数据超出阈值时能够及时报警,提高了鸡舍管理的效率和自动化水平。

摘要：为了探讨饲喂不同精粗比日粮对肝脏氨基酸分配与重分配的影响及可能的机制,本研究选择6只安装了肝脏多血管瘘的健康泌乳奶山羊,分别饲喂精粗比为40∶60(对照组)和60∶40(高精料组)的饲料,2×2拉丁方设计,饲喂期16周。期间取乳样,测定乳蛋白含量,并通过肝门静脉、肝静脉和股动脉血管瘘取血,RP-HPLC法测定血浆中游离氨基酸含量。结果表明,高精料组山羊乳中乳蛋白含量显著低于低精料组(P<0.05);肝门静脉血液中各游离氨基酸含量均高于低精料组,而肝静脉和股动脉血液中各游离氨基酸含量均低于低精料组,即高精料组各游离氨基酸在肝脏中的消耗量均多于低精料组,通过股动脉进入乳腺组织的氨基酸含量也少于低精料组。本研究结果显示,长期饲喂高精料日粮,乳蛋白含量降低。其机制与肝脏中氨基酸分配与重分配发生改变,氨基酸在肝脏中消耗量增大,进入乳腺组织合成乳蛋白的前体物氨基酸减少有关。

摘要：为了探讨高精料饲喂产生LPS对奶山羊血浆游离氨基酸重分配的影响及其机制,本研究选用奶山羊6只,随机分为2组,分别饲喂精粗比为4∶6(低精料组)和6∶4(高精料组)的日粮,交叉试验设计,分2期进行,每期14d。在试验第3周测定瘤胃液pH、血液中LPS含量和游离氨基酸含量。结果表明,自第3周,高精料组山羊开始出现亚急性瘤胃酸中毒,外周血液中LPS含量显著升高(P<0.05);血浆中各氨基酸含量均发生变化,表现为Glu、Ala含量极显著降低(P<0.01),Gln、Arg、Thr、Lys、总非必需氨基酸、总游离氨基酸、总生糖氨基酸均显著低于低精料组(P<0.05)。结果提示,饲粮中精饲料比例增加,血浆氨基酸发生重分配,其机理可能与瘤胃pH下降和血液中LPS含量升高有关。