摘要：旨在提供一种新型的转录激活样效应子核酸酶(Transcription activator-like effector nucleases,TALENs)模块组装法(Unit assembly,UA)及活性鉴定方法。利用TALE-NT 2.0在线工具在线粒体DNA(Mitochondrial DNA,mt DNA)设计TALENs识别位点和剪切位点,借助p EGFP-N1质粒将该段靶序列随机整合于HEK293F核基因组中,构建HEK293F-T1细胞系,用于TALENs活性鉴定。依据转录激活样效应子(Transcription activator-like effectors,TALEs)自然单元模块序列,设计出一种新型的人工TALEs偏单元;根据TALENs识别位点,选取相应一单元模块,利用UA法组装;并设计出含有相应双酶切位点的TALEs串联模块序列和TALENs载体序列,定向连接后瞬时转染HEK293F-T1细胞系。结果显示,新型模块组装法定向组装TALEs模块,克隆效率高且瞬时转染后可看到清晰的套峰。结果表明,新型模块组装方法提高了TALENs构建过程中的克隆效率,并且不受末位0.5模块的RVD(repeat-variable diresidue)限制,增加了靶序列设计的灵活性。

摘要：在文献报道次卟啉合成方法的基础上，对原反应操作进行了改进：设计了程序升温法。反应分两个阶段：第一阶段110℃～12O℃控温，使充分生成中间过渡态产物；第二阶段190℃～200℃控温，再发生消除反应，使反应趋于合理。后处理中，改用热水代替乙醚研磨、洗涤，使操作简便可行。