摘要：背景:血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1作为氧化型低密度脂蛋白的特异性受体,参与血管性炎症和粥样斑块的发生发展过程。近年发现他汀类药物调脂外抗炎症作用可能是其抗动脉粥样硬化机制之一。目的:验证氟伐他汀对氧化低密度脂蛋白刺激下人脐静脉内皮细胞氧化型低密度脂蛋白受体1表达的影响。设计、时间及地点:对比观察,实验于2006-08/2007-05在中南大学湘雅医学院附属第二医院医学实验中心完成。材料:人脐静脉内皮细胞株购自美国ATCC公司。氟伐他汀原粉购自北京诺华制药有限公司。方法:培养人脐静脉内皮细胞株,按以下方法处理:①用氧化型低密度脂蛋白刺激细胞(终浓度分别为25,50,100mg/L)。②以氧化型低密度脂蛋白受体1中和抗体干预后,再加入50mg/L氧化型低密度脂蛋白干预。③以核因子кB抑制剂PDTC干预后,再加入50mg/L氧化型低密度脂蛋白干预。④以不同浓度(0.01,0.1,1μmol/L)氟伐他汀干预后,再加入50mg/L氧化型低密度脂蛋白干预。⑤空白组为对照。主要观察指标:采用反转录-聚合酶链反应技术检测氧化型低密度脂蛋白受体1mRNA的表达水平。结果:在氧化型低密度脂蛋白各剂量组(25,50,100mg/L)均可上调人脐静脉内皮细胞氧化型低密度脂蛋白受体1mRNA的表达,在25～50mg/L剂量范围内呈显著的剂量-效应关系(P<0.01)。预先分别给予氧化型低密度脂蛋白受体1中和抗体和核因子кB抑制剂PDTC干预,氧化型低密度脂蛋白受体1mRNA的表达均下调。予以不同浓度氟伐他汀干预呈浓度依赖性降低氧化型低密度脂蛋白刺激的人脐静脉内皮细胞氧化型低密度脂蛋白受体1mRNA的表达。结论:氟伐他汀呈浓度依赖性降低氧化型低密度脂蛋白刺激下人脐静脉内皮细胞氧化型低密度脂蛋白受体1的表达,可能与其抑制核因子кB的表达,减轻内皮细胞炎症反应,从而发挥其独立于降脂外的抗炎效应。

摘要：目的设计合成有效的靶向血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1基因的发卡样siRNA(shRNA)表达载体。方法根据siRNA的设计原则,以血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1为靶基因设计并合成小发卡结构两端配对的siRNA寡核苷酸链,再经变性、复性后形成双链血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1shRNA。采用DNA重组技术,将血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1shRNA双链与线性化pGenesil-1质粒表达载体连接,脂质体法转染人脐静脉内皮细胞株,半定量逆转录聚合酶链反应法检测血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1mRNA的表达。结果测序鉴定发现插入的发卡样序列正确,成功合成了发卡样血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1基因RNA干扰表达载体;靶向血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1基因的发卡样siRNA表达载体转染人脐静脉内皮细胞株后,其凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1mRNA的表达显著下调。结论成功构建了能有效抑制血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1mRNA表达的发卡样血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1基因RNA干扰表达载体,为进一步利用RNA干扰技术防治动脉粥样硬化提供一种研究基础。