摘要：目的比较流感嗜血杆菌(Hi)16S rRNA和p6基因的PCR检测结果的差异。方法以Hi的16S rRNA基因及外膜蛋白p6基因作为靶基因,设计特异性引物分别对临床标本分离的43株Hi进行PCR快速检测。结果34株16S rRNA基因扩增出538bp大小DNA片段,检出率为79%;43株p6基因均扩增出296bp大小DNA片段,检出率为100%。同时,其他细菌对照株16S rRNA和p6基因扩增均未出现假阳性结果。结论相比于16S rRNA基因,p6基因对Hi检测和鉴定更具特异性,可用于临床对Hi感染疾病的快速诊断和流行病学研究。

摘要：目的:筛选日本血吸虫可能的特异性膜蛋白,并根据筛选结果在日本血吸虫成虫中尝试克隆某一可能具有免疫保护功能的预测蛋白的编码序列,为血吸虫病防治研究寻找新的疫苗候选分子或药物靶标。方法:以"Schistosoma japonicum"和"membrane or tegument"为关键词,在公共数据库NCBI进行查找并下载数据,建立本地化的日本血吸虫膜蛋白序列数据库,与本实验室建立的曼氏血吸虫、人类、大鼠及小鼠蛋白质数据库等进行多序列比对,筛选日本血吸虫特异性膜蛋白,同时通过CBS网站相应分析工具软件预测目的蛋白的特征和功能。针对其中可能有免疫保护功能的预测蛋白的预测编码序列设计引物,采用RT-PCR技术从日本血吸虫成虫中扩增出该编码序列,并克隆入pGEX-4T-1构建原核表达重组质粒。结果:共检索到153个理论推测的日本血吸虫膜蛋白序列,筛选出28个可能的日本血吸虫特异性膜蛋白;成功从日本血吸虫成虫中扩增出相对分子质量为15 000的预测蛋白的预测编码序列,暂命名为sj15基因,同时成功构建pGEX-4T-1-sj15重组质粒。结论:成功筛选出多个日本血吸虫特异性膜蛋白;从日本血吸虫成虫中成功克隆出GenBank公布的预测的sj15基因,证实了成虫中该预测基因的存在,并成功构建原核表达载体,为进一步的功能研究奠定了基础。

摘要：目的用生物信息学的方法预测肺炎链球菌自溶酶蛋白(LytA)可能的抗原表位,合成带有linker(Gly4 Ser1)3序列的融合基因片断(l1l2),并在原核系统表达。方法利用多种生物信息学软件,在二级结构预测抗原表位分值的基础上结合单参数分析结果,预测并设计LytA可能的重组抗原表位(L1L2)。扩增该表位基因l1l2,利用分子克隆技术构建重组质粒。经测序鉴定后,转入宿主菌JM109中原核表达L1L2多肽片断与载体标签蛋白还原性谷胱苷肽(GST)的融合蛋白GST-L1L2。结果预测表明序列2～28(EINVSKLRTDLPQVGVQPYRQVHAHST)、序列98～112(FMTDYRLYIELLRNL)分别为可能的B细胞和T细胞抗原表位。用PCR技术合成了l1l2片段,构建重组质粒pGEX-4T-1-l1l2,成功转化大肠杆菌JM109。结论经测序验证成功构建了重组质粒pGEX-L1L2,并转化大肠杆菌JM109,SDS-PAGE分析显示该重组质粒在原核系统中得到了表达,为后继多肽疫苗研究奠定了基础。

摘要：目的评价人员活动和空气净化器对支气管镜室空气微生物及颗粒物的影响。方法依照支气管镜室有无人员活动和空气净化器,将实验分成四组:动态无净化组、动态净化组、静态无净化组、静态净化组,在五个不同时间点(0、0.5、1、2、4 h)对室内空气进行采样和分析,用浮游菌法采集空气中的微生物并培养、计数,用DT-9881M激光尘埃粒子计数器检测颗粒物浓度,统计方法采用析因设计的方差分析。结果动态无净化组的细菌、真菌、总微生物(细菌+真菌)、PM_(2.5)和PM_(2.5~10.0)菌落数/浓度分别为(113.53±7.78)CFU/m^3、(89.67±7.17)CFU/m^3、(203.20±10.92)CFU/m^3、(86 557.20±4 158.29)个/m^3和(659.69±38.91)个/m^3,静态无净化组分别为(84.33±3.65)CFU/m^3、(65.00±2.65)CFU/m^3、(149.33±4.98)CFU/m^3、(45 812.64±1 279.61)个/m^3和(189.15±4.64)个/m^3,动态净化组分别为(84.80±8.08)CFU/m^3、(90.40±5.50)CFU/m^3、(175.20±9.22)CFU/m^3、(49 336.38±2 039.16)个/m^3和(218.36±7.02)个/m^3,静态净化组分别为(67.80±5.63)CFU/m^3、(38.27±3.70)CFU/m^3、(106.07±6.76)CFU/m^3、(29 772.53±2 212.93)个/m^3和(124.80±7.16)个/m^3,细菌、总微生物、PM_(2.5)、PM_(2.5~10.0)菌落数/浓度动态组高于静态组,无净化组高于净化组(均P<0.05),真菌菌落数动态无净化组高于静态无净化组,静态净化组低于静态无净化组(均P<0.05),动态净化组与无净化组间无明显差异(P=0.936)。结论人员活动增加支管镜室空气微生物和颗粒物的菌落数/浓度,空气净化器能降低支气管镜室空气中的细菌、总微生物和颗粒物的菌落数/浓度。

摘要：目的用PCR方法进行流感嗜血杆菌荚膜编码基因分型,调查儿童急性呼吸道感染患儿流感嗜血杆菌的感染情况。方法以流感嗜血杆菌荚膜编码基因(bexA)和荚膜分型编码基因(Hi-a、Hi-b)作为靶基因设计引物,用PCR方法扩增标准菌株为ATCC9006、ATCC49247、EQA0609的3个编码基因并测序,在此基础上对临床分离的43株流感嗜血杆菌进行荚膜基因分型研究。结果PCR结果显示标准菌株ATCC49247未扩增出bexA编码基因,ATCC9006扩增出bexA和Hi-a编码基因,EQA0609扩增出为bexA和Hi-b编码基因,并且PCR产物序列与GenBank公布的序列一致性高。临床分离菌株Hi未扩增出bexA、Hi-a及Hi-b编码基因。结论本实验研究表明广州地区儿童急性呼吸道感染患儿所分离的流感嗜血杆菌主要是不可分型的无荚膜菌株。