摘要：目的利用CRISPR/Cas9技术构建敲除G6PD基因常见突变位点——c.392G>T(p.131G>V)突变位点的HEK293T细胞,为后期研究其基因修复提供可靠的细胞模型。方法针对G6PD基因c.392G>T(p.131G>V)突变位点靶向设计4对向导RNA(sgRNA),构建表达Cas9-sgRNA的外源PX458质粒,将其转染至HEK293T细胞内,通过流式细胞术分选表达GFP荧光蛋白的细胞进行培养,利用T7核酸内切酶1(T7E1)酶切验证CRISPR/Cas9的剪切效率,有限稀释法筛选单克隆细胞,测序鉴定并检测G6PD mRNA、蛋白表达和细胞功能的改变。结果成功构建基于G6PD基因c.392G>T(p.131G>V)突变位点的Cas9-sgRNA外源PX458质粒,T7E1酶切检测四对sgRNA的编辑效率分别为6.74%、12.36%、12.54%、2.94%。测序鉴定敲除G6PD基因c.392G>T(p.131G>V)突变位点的细胞株构建成功,细胞G6PDmRNA、蛋白表达和G6PD酶活性降低,细胞增殖能力下降,维生素K3诱导细胞死亡增加。结论本研究成功构建敲除G6PD基因c.392G>T(p.131G>V)突变位点的HEK293T稳定细胞模型,为后期研究基因的修复奠定了基础。

摘要：目的为规范儿科研究者发起的临床研究项目(IIT)管理,提高项目执行质量,本研究以上海某儿童三甲医院为例,分析总结儿科IIT项目执行过程中存在的主要质量问题,并提出适当建议。方法 2020—2022年,根据上海交通大学医学院IIT项目质量评估体系,并结合儿科特点,采用中心化监查方法,对上海某儿童三甲医院IIT项目进行抽查与评估。结果共核查IIT项目77项,含启动阶段27项,执行阶段36项,结题阶段14项。在伦理合规性方面,存在研究者伦理意识淡薄、知情同意书签署不规范等问题;执行质量及科学性主要存在CRF设计不规范、安全性管理意识不足、不注重研究注册和专业化数据管理、随机化和盲法管理不规范等问题;执行进度上存在入组率及经费执行率偏低等问题。结论儿科IIT项目执行过程中的质量管理存在一定问题,医疗机构应加强建立有效运行的过程管理与监管体系,进而提升IIT执行质量。

摘要：该文旨在利用CRISPR/Cas9构建G6PD基因c.1388G>A突变的HEK293/K562细胞株,为G6PD缺陷症及其修复研究提供细胞模型。针对G6PD基因c.1388G>A位点设计单链向导RNA(sg RNA)与突变同源臂,利用CRISPR/Cas9联合同源重组修复(HDR)构建G6PD基因c.1388G>A突变的HEK293细胞株与红白血病K562细胞株;qRT-PCR、Western blot检测G6PD基因表达;CCK8检测细胞增殖;G6PD/6PGD比值法检测G6PD酶活性;结晶紫染色与Annexin V-APC/7-AAD验证突变细胞株对氧化活性药物维生素K3与伯安喹的耐受情况。结果显示,成功构建CRISPR/Cas9双质粒载体系统;筛选单克隆细胞经测序鉴定显示,成功构建G6PD基因c.1388G>A突变的HEK293与K562细胞株,且无脱靶;进一步发现,c.1388G>A突变不影响HEK293与K562细胞G6PD基因mRNA转录与蛋白翻译,但细胞增殖减慢,G6PD酶活性下降;突变HEK293细胞对维生素K3与伯安喹的耐受力减弱,突变K562细胞对伯安喹耐受能力减弱。该研究成功构建G6PD基因c.1388G>A突变的HEK293与K562细胞株,为G6PD缺陷症及后期基因修复研究提供细胞模型。

摘要：目的针对家长对两种儿童易发病流行性感冒(简称流感)和胃肠炎的认知现状进行调研,并给出相关建议。方法以目前生活在中国(以长三角地区为主),年龄为18~62岁的0~14岁儿童监护人(包括父母、兄长和姐姐、祖父母)为受访对象。调查题为“关于两种儿童易发病的认知现状调研”,于2022年7月15—20日采用线上与线下相结合的方式进行问卷发放。通过检索流感和胃肠炎基础知识的最新相关文献和同行进行的儿童监护人对疾病认知情况的调查,设计了问卷条目。问卷包含3个部分:受访者基本信息、针对流感和胃肠炎的认知水平问卷(疾病概况、疾病预防、疾病诊断、疾病治疗4个维度)、针对流感和胃肠炎的解决方案。对收集的问卷进行量化评分,采用单因素分析、多因素logistic回归分析影响儿童家长认知状况的因素。结果2022年7月15—20日共发放问卷276份,答卷均收回,回收率为100%,问卷有效率100%,最终样本人数共276名。受访者流感认知水平问卷平均分为(54.13±13.50)分,及格率为48.55%(134/276),不及格率为51.45%(142/276);受访者胃肠炎认知水平问卷平均分为(49.70±14.94)分,及格率为35.14%(97/276),不及格率为64.86%(179/276)。单因素分析结果显示,影响受访者对流感认知状况的因素为监护关系(P=0.011)、儿童年龄(P0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,居住地(市区)是影响受访者对流感(OR=0.086,95%CI为0.040~0.183,P<0.001)和胃肠炎(OR=0.400,95%CI为0.229~0.701,P=0.001)认知状况的因素。结论居住在城市的家长相对于居住在乡镇的家长对儿童流感和胃肠炎的认知水平更高,有待提高所有家长对这两类儿童易发病的整体认知水平,建议加强乡镇、农村等地区的健康科普工作。

摘要：基于高速电机直驱与空气轴承技术的无油离心空压机增压技术在燃料电池进气系统中有着广阔的应用前景。由于空气轴承的轴向承载能力与止推轴承效率成反比,控制和减小空压机轴向推力对于提升空压机工作可靠性及运行效率至关重要。以燃料电池双级离心空压机为研究对象,设计了不同叶轮背腔模型,采用数值方法,研究轴隙泄漏、背腔轴向间隙对空压机性能及轴向力的影响。结果表明,在轴隙泄漏的影响下,背腔结构对轴向推力产生显著影响,且随着轴隙泄漏量增加,背腔结构的影响加剧。在双级结构下,高压级压气机背腔结构的变化对总体轴向推力的影响占据主导作用,通过合理的背腔结构设计并结合背腔密封技术,可有效实现对空压机轴向推力的控制,并减小轴隙泄漏对空压机性能带来的负面影响。