摘要：【课堂再现】设计意图：此课例以人文情怀立意，在中国传统文化视野的观照下，挖掘文本的人文内涵和文学意蕴，诗意审美，含英咀华，采撷这篇经典散文的语言文辞之美、自然风物之美、风俗文化之美、思想情怀之美，表达一种“审美词汇”和引读方式。

摘要：党的十九大报告提出＂推进依法行政,严格规范公正文明执法＂。自治区第十二次党代会报告提出要＂深化行政执法体制改革＂。自治区编办作为牵头负责单位,高点站位,总体设计,扎实推进行政执法体制改革。按照全区各地、各行各业＂一盘棋＂的思想,确定＂条块并进、点面结合＂的工作.

摘要：[目的]为获得MDV-1强弱毒株Meq基因序列的差异。[方法]根据GENE BANK登录的马立克氏病毒Meq基因序列,设计一对引物,采用PCR技术对MDV-I型国内商用CVI988/Rispens疫苗株和参考强毒京-1(BJ-1)株的Meq基因进行了扩增,并将扩增产物提纯后克隆到pcDNA3.1(+)上,进行酶切鉴定及测序验证。[结果]CVI988疫苗株和BJ-1强毒株的Meq基因开放阅读框(ORF)长度分别为1200和1197bp。通过与国际标准强毒GA株Meq基因进行比较,BJ-1株和CVI988株Meq基因中分别有一段180和177bp的插入序列,第211位核苷酸由G变为T,导致第71位氨基酸由丙氨酸A变为丝氨酸S;同时,CVI988株Meq基因第228位核苷酸由A变为G,导致第77位氨基酸由赖氨酸K变为谷氨酸E。此外,与BJ-1株相比,CVI988株Meq基因在576～578bp之间缺失3个碱基(ACC),并导致第193位脯氨酸P的缺失,该突变发生在一个多脯氨酸重复区域内。[结论]MDV-1强弱毒株Meq基因序列存在明显差异,为从其分子水平进行区分及生物学功能的研究奠定了基础。

摘要：为建立快速检测Ⅰ群禽腺病毒(FAdV-I)血清型通用PCR方法,根据FAdV-Ⅰ12个血清型基因保守区设计引物,建立了二温式PCR和VPCR方法。结果显示:本研究建立的FAdV-Ⅰ二温式PCR方法,在90℃~94℃变性3 s、70℃~74℃退火兼延伸8 s,循环35~40次时,最快可在15 min内完成扩增;对分属5个种的5个血清型毒株检测都呈阳性,对EDSV、NDV、沙门菌等12种禽常见病原核酸检测呈阴性;最低检测质粒拷贝数为13.9 copies/μL,最低检测病毒滴度为100.3 EID50/0.1 mL;对源于FAdV-4感染致死SPF鸡的心脏、肝脏、脾脏等14种样品核酸提取物检测均为阳性。建立的VPCR,在92℃变性0 s、70℃退火延伸0 s,40次循环时,可23 min完成,其最低检测质粒拷贝数亦为13.9 copies/μL;对150份采集自安徽省部分地区样品及送检病料的检测与分析显示,所建立的二温式PCR和VPCR总阳性检出均率为30.7%,其符合率为100%。本研究表明,所建立的通用型二温式PCR和VPCR方法,均可用于Ⅰ群FAdV的快速检测与鉴定。

摘要：为建立快速诊断小鹅瘟的PCR方法,根据已发表的GPV主要结构蛋白VP3基因序列,经多序列比对和Oligo 6.0软件分析设计特异性PCR引物。以微量法提取病鹅肝组织DNA,优化PCR反应引物退火温度、循环次数和鉴定其特异性,并与酚氯仿法和煮沸法进行同步对比研究。结果显示,建立的PCR检测方法能够特异性检测病鹅肝组织中GPV的核酸,其扩增片段大小为343bp,最佳退火温度为58℃,最佳循环次数为35次。微量法提取的病毒核酸PCR检测灵敏度分别是酚氯仿法的50倍和煮沸法的2500倍。该PCR检测方法不与鹅副黏病毒、禽流感病毒、传染性支气管炎病毒、鸭瘟病毒以及健康鹅肝组织发生交叉反应。本研究建立的GPV PCR检测方法能够快速诊断小鹅瘟。

摘要：目的:建立快速、灵敏、特异的基因2型鹅星状病毒(Goose astrovirus 2,GoAstV-2)检测方法。方法:以GoAstV-2 ORF2基因为靶标,设计特异性检测引物并构建含目标基因的重组质粒作为阳性质粒标准品,以其为模板优化建立一种EvaGreen饱和染料荧光定量一步法RT-PCR检测方法。结果:所建立方法采用dUTP/UDG酶防污染体系,其标准曲线在2.58×10^(1)~2.58×10^(7) copies/μL质粒模板量呈现良好的线性关系,斜率为-3.413,相关系数(R^(2))为0.995,熔解温度T_(M)为(85.5±0.5)℃;该方法对质粒标准品检测灵敏度下限为25.8 copies/μL;该方法特异性检测GoAstV-2,而新城疫病毒(NDV)、H5型禽流感病毒(AIV-H5)、禽呼肠孤病毒(ARV)等11种常见禽传染病病原检测结果均为阴性。重复性试验显示,组内和组间变异系数均小于2%,表明其具有良好的重复性。GoAstV-2感染病死鹅组织定量检测显示,心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、腺胃、胰腺、小肠、大脑和肌肉组织均可检测出GoAstV-2,其中肾脏病毒含量最高(2.58×10^(11) copies/g),大脑和肌肉组织含毒量较低。32份临床送检病死鹅组织样品的检测显示,9份存在GoAstV-2感染,阳性率为28.1%。结论:EvaGreen荧光定量一步法RT-PCR能高效检测GoAstV-2,可应用于禽类GoAstV-2感染的诊断和净化检测。

摘要：目的　了解马立克病疱疹病毒（ＭＤＶ）强毒ＧＡ株Ｂａｍ ＨＩＬ片段在ＭＤＶ致瘤毒株京－１株（中国特有的地方株）所诱导的淋巴肿瘤组织中转录状况。方法　从人工感染ＭＤＶ致瘤株京－１株发病鸡内脏淋巴肿瘤组织中分离ｍ ＲＮＡ，根据已发表的ＭＤＶ肿瘤候选基因ｍ ｅｑ 基因序列和我们已测定的强毒ＧＡ株Ｂａｍ ＨＩＬ片段序列，设计两段寡核苷酸引物，以此ｍ ＲＮＡ为模板经逆转录合成ｃＤＮＡ，应用ＰＣＲ法进行目的基因扩增。用非放射性Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ 分别标记ＧＡ株基因组Ｂａｍ ＨＩＩ２和ＬＤＮＡ片段，制成核酸探针，分别与ＰＣＲ产物作Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分子杂交鉴定。结果　逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增的ｃＤＮＡ大小约７３０ ｂｐ，该ｃＤＮＡ能同时与上述两探针发生免疫呈色反应。结论　①ＭＤＶ ｍ ｅｑ基因的转录可以延伸到其右侧的Ｂａｍ ＨＩＬ片段区；②Ｂａｍ ＨＩＬ区在ＭＤＶ致瘤株京－１株所诱导的淋巴肿瘤组织中可发生转录。