摘要：目的:设计合成干扰细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase 1/2,ERK1/2)基因表达的不同型小干扰RNA(siRNA),筛选出能高效抑制ERK1/2基因表达的siRNA。方法:根据大鼠ERK1/2mRNA的序列,设计合成针对ERK1基因和ERK2基因的siRNA序列各3对,利用脂质体将siRNA转染入大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs),实时荧光定量RT-PCR检测ERK1/2mRNA表达水平以确定干扰效果。结果:设计合成的3对ERK1siRNA和3对ERK2siRNA对ERK1/2基因均有一定的抑制作用,ERK1-siRNA1和ERK2-siRNA2在低转染浓度组中的抑制率最高,分别为95.77%和93.23%。结论:成功设计合成了针对ERK1/2基因的siRNA,并从中筛选出能特异且高效抑制ERK1/2表达的siRNA。

摘要：目的:探讨干扰Hiwi基因对三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡的影响。方法:培养并转染三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231,按照实验设计分为6组,转染后应用q RT-PCR、Western blot分析Hiwi基因的m RNA及其靶蛋白的表达情况,根据结果评估干扰效果筛选有效的si RNA干扰片段作为干扰组(Hiwi10330组),再按照试验设计分为3组分别是干扰组,阴性对照组(NC组)、空白对照组(Blank组),在细胞转染后进行细胞流式检测各实验组细胞凋亡率。结果:靶向Hiwi基因的si RNA干扰后,干扰组中m RNA的表达量明显降低(P<0.05),Hiwi基因靶蛋白的表达也出现了明显的抑制(P<0.05)。靶向Hiwi基因的si RNA干扰后,干扰组MDA-MB-231细胞的凋亡率与NC和Blank组相比明显升高(P<0.05)。结论:si RNA靶向沉默Hiwi基因后,乳腺癌细胞MDA-MB-231的凋亡率明显升高,提示Hiwi基因可能成为三阴乳腺癌的一潜在治疗靶点。