摘要：根据GenBank中发布的烟曲霉菌壳聚糖酶(Aspergillusfumigatuschitosanase,EC3.2.1.132)基因序列人工合成8条DNA长链及4条引物链。DNA链的设计上在不改变壳聚糖酶氨基酸组成的前提下选择大肠杆菌使用频率高的密码子。PCR拼接法扩增壳聚糖酶基因并克隆入pGEM-Teasy载体进行序列分析,进一步亚克隆入表达载体pGEX-3X。重组质粒pGEX-Csn转化***5α,IPTG诱导表达,亲和层析及FactorXa酶解纯化重组Csn。所得重组壳聚糖酶具有降解壳聚糖的生物活性,其活性受温度及pH值的影响。

摘要：目的:建立突变型人白细胞介素-2(rhIL-2)基因大肠杆菌表达系统,为rhIL-2的生产及临床应用奠定基础。方法:自人胎盘组织中提取总RNA,逆转录PCR(RT-PCR)扩增突变型人IL-2基因cDNA,通过对下游引物的设计将编码125位半胱氨酸(C125)的密码子TGT更改为编码丝氨酸的密码子TCT。构建表达型重组质粒pBV-IL-2熏温度诱导表达,表达产物行SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)及WesternBlot鉴定。结果:DNA序列分析证实,重组质粒pBV-IL-2含有突变型人IL-2编码序列及正确的开放读码框架。SDS-PAGE显示,诱导表达碎菌后的沉淀中有分子质量大小约为16.5ku的外源蛋白产生,经Western印迹(WesternBlot)证明为rhIL-2。结论:成功构建了突变型人白细胞介素-2大肠杆菌表达系统,表达产物主要以包涵体的形式存在于碎菌后的沉淀中。

摘要：目的观察碘过量对大鼠脑神经元特异性烯醇化酶（NSE）基因表达的影响。方法选用150只断乳1月龄的健康Wistar大鼠，按5×2析因设计分为10组，每组15只。按摄碘量分为正常碘（NI）、5倍碘（5HI）、10倍碘（10HI）、50倍碘（50HI）、100倍碘（100HI）5个水平，饲喂时间为3、6个月。实验期满后，取全部大鼠血样，用放射免疫分析方法测定血清总甲状腺素（TT4）、总三碘甲状腺原氨酸（TT3）、游离甲状腺素（FT4）、游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）、反三碘甲状腺原氨酸（TT3）水平；取大鼠脑组织，采用RT—PCR方法检测脑组织NSE mRNA的表达。结果各碘水平组TT4、TT3变化明显（F值分别为18．867、27．287，P〈0．01），时间和碘水平对TT4存在交互作用（F=2．486，P〈0．05）；100HI组TT4、TT3均低于同时间NI、5HI、10HI、50HI组（P均〈0．01）。血清FT4、FT3、TT3水平，在3、6个月时变化明显（F值分别为4．968、27．046、59．776，P〈0．05或〈0．01），各碘水平组间变化明显（F值分别为33．058、28．420、17．482，P均〈0．01），时间和碘水平对FT3、rT3存在交互作用（F值分别为6．894、5．233，P均〈0．01）；100HI组FT4、FT3、rT3低于同时间其他组（P〈0．01或〈0．05）。各碘水平间NSE mRNA变化明显（F=29．006，P均〈0．05）；3、6个月100HI组大鼠脑中NSE mRNA水平（0．61±0．19、0．61±0.22），与NI（0．73±0．13、0．72±0．26）、5HI（0．72±0．15、0．72±0．16）、10HI（0．73±0．32、0．70±0．13）、50HI（0．71±0．18、0．69±0．31）组比较降低（P均〈0．05）。3、6个月时血清FT3、FT4与NSE mRNA水平均存在相关关系（r值分别为0．987、0．969及0．890、0．910，P均〈0．05）。结论NSE基因的表达对过量碘摄入呈现出耐受性且有一定的阈值；当过量碘摄入为正常100倍时，在转录水平影响NSE基因的表达，表现为抑制NSE mRNA水平；在过量碘引发NSE转录减低的调控中，FT4和FT3可能均起着重要作用。

摘要：构建pGEX-3X/大肠杆菌偏嗜性人促甲状腺激素(hTSH)βDNA编码序列原核表达载体,并在***5α中进行表达,用于GD(Graves diease)的实验研究。方法:用大肠杆菌偏嗜性密码子替换已知hTSHβ亚基基因编码序列中相应的密码子,按重新设计后的编码序列进行DNA化学合成,然后克隆入表达载体pGEX-3X并进行酶切电泳、测序鉴定,进而在*** DH5α中进行诱导表达。对所表达的GST融合蛋白进行SDS-PAGE、Western blotting及hTSH电化学发光免疫测定。结果:经鉴定,重组质粒pGEX-3X/hTSHβ含有与预期结果一致的435bp编码hTSHβ链的DNA序列。表达产物为hTSHβ与GST融合蛋白,分子质量约42ku,于SDS-PAGE中的相应部位可见深染的特异性蛋白条带,可被GST抗体识别并可被抗hTSH抗体检测。结论:实验成功建立了hTSHβ肽链的体外表达系统,为进一步制备hTSHAb及进行GD的研究奠定了基础。

摘要：目的 :获得适于大肠杆菌表达的人γ干扰素(hIFN -γ)基因。方法 :用大肠杆菌偏嗜性密码子替换已知hIFN -γ基因编码序列中相应的密码子,将重新设计后的编码序列分为六段进行人工化学合成,通过PCR拼接技术扩增出大肠杆菌偏嗜性hIFN -γ基因编码序列 ,并进行克隆及序列分析。结果 :经序列分析证实 ,重组pGEM-hIFN -γ质粒含有与预期结果一致的hIFN -γ基因编码序列。结论 :成功进行了大肠杆菌偏嗜性hIFN -γ基因的克隆,为hIFN

摘要：定点诱变技术广泛应用于基因工程和蛋白质工程，常用的方法有化学诱变、寡核苷酸介导的诱变，盒式诱变和基于PCR的诱变，其中基于PCR的诱变包括重叠延伸PCR（over—lapextensionPCR，OE—PCR），大引物PCR（megaprimerPCR），环状质粒PCR。本方法属于环状质粒PCR，与常用的OE—PCR相比，本方法在质粒上进行诱变更为简便快捷，只需设计一对引物。进行一次PCR。

摘要：艺术体操是一项美的运动，它融动作造型美、身体曲线美、音乐和谐美、色彩美等为一体，能充分展现协调、韵律、柔美、优雅等女性健美气质。1、重视选材1．1重视柔韧素质和力量素质柔韧、速度、力量、灵敏、耐力素质是艺术体操中不可缺少的重要素质。良好的柔韧素质是完成艺术体操动作技术和提高动作质量的基础，