摘要：目的原核表达和纯化腺相关病毒(AAV)衣壳保守区抗原肽,制备抗AAV衣壳保守区的兔多克隆抗体。方法设计并合成编码AAV衣壳蛋白保守区的DNA,将序列克隆到载体pET30a,获得质粒pET30a-AAV-CR,原核表达并纯化保守区多价抗原肽,考马斯蓝染色法及Western blot法对AAV保守区多价抗原肽进行鉴定。将日本大耳朵白兔分为实验组与对照组(1只/组),实验组注射AAV保守区蛋白制备多克隆抗体,对照组注射PBS,ELISA检测抗体效价,Western blot及细胞免疫荧光法检测抗体应用效果。结果成功构建了表达AAV衣壳保守区抗原肽的质粒pET30a-AAV-CR,表达纯化得到相对分子质量为17000的蛋白质;纯化后的蛋白可在兔体内诱导产生针对AAV衣壳保守区的抗体,且该抗体能广泛性识别AAV1-AAV10衣壳蛋白序列。结论诱导出AAV衣壳保守区蛋白并成功获得了抗AAV衣壳保守区的多克隆抗体,为后续载体开发以及生物学功能研究奠定了基础。

摘要：4月9日,河北华热工程设计有限公司(以下简称河北华热)与芬兰普兰诺拉有限公司(以下简称普兰诺拉公司)合作建立的国内第一家中芬供热技术合作中心在石家庄市正式签约揭牌,这意味着河北与芬兰在能源效率、可再生能源和供热与制冷领域搭建起了一个国际性的创新合作平台。

摘要：目的 原核表达、纯化腺相关病毒9(adeno-associated virus 9,AAV9)衣壳可变区蛋白,并制备针对AAV9衣壳可变区的兔多克隆抗体。方法 设计并合成编码AAV9衣壳蛋白可变区的DNA序列,插入原核表达载体pET-30a获得质粒pET-30a-AAV-VR,转化*** BL21(DE3),IPTG诱导表达多价抗原肽,在变性条件下经Ni-NTA树脂纯化,透析复性后将AAV9可变区蛋白免疫雄性日本大耳白兔,制备多克隆抗体,间接ELISA法检测抗体效价,Western blot及细胞免疫荧光法检测抗体的特异性。结果 表达AAV9衣壳可变区蛋白的重组原核表达质粒pET-30a-AAV-VR经XhoⅠ和BglⅡ双酶切鉴定构建正确。表达的蛋白相对分子质量约为20 000,纯化后可被His标签抗体识别。制备的兔多克隆抗体效价为1∶10 240 000,能特异性识别AAV9衣壳蛋白。结论 成功表达了AAV9衣壳可变区蛋白,并制备了高效价的兔多克隆抗体,为后续AAV载体开发以及AAV生物学功能研究奠定了基础。