摘要：为研究HB株柔嫩艾美耳球虫(***)AMA-1基因的免疫原性,根据GenBank收录的AMA-1基因序列设计了1对引物,对HB株***的AMA-1基因进行克隆,应用生物信息学分析软件预测AMA-1基因的核苷酸及编码的蛋白质的结构和功能。连接pPIC9载体,并与细胞因子IL-2串联,构建真核表达载体pPIC9-IL-2-AMA-1,转化毕赤酵母细胞GS115,进行蛋白表达及纯化验证。结果显示,HB株*** AMA-1基因全长为1617bp,编码535个氨基酸,具有跨膜区及信号肽。经酶切和测序鉴定表明,真核表达载体pPIC9-IL-2-AMA-1构建成功。毕赤酵母转化结果表明,成功将重组载体转化到毕赤酵母中,PCR鉴定得到2200,2100bp 2条带。Western blot检测结果表明AMA-1在毕赤酵母中得到了很好的表达。本试验结果为AMA-1基因的功能和核酸疫苗的研制提供依据。

摘要：为了探讨低有效磷、低蛋白日粮中单独或组合添加植酸酶和蛋白酶对肉鸡血清生化指标的影响,试验采用单因子设计,将168只8日龄罗斯308肉鸡随机分为4组,对照组为标准日粮,1组为添加植酸酶的低磷日粮,2组为添加蛋白酶的低蛋白日粮,3组为添加植酸酶和蛋白酶的低磷、低蛋白日粮,试验期为5周,测定第21,42天血清碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)、谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)活性和总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、钙(Ca)、磷(P)、尿酸(UA)、肌酐(Cre)、总胆红素(***)、直接胆红素(***)含量等指标。结果表明:各组血清ALP、LDH、GPT、GOT活性以及Ca、P、TP、ALB、UA、Cre、***、***含量均无显著差异(P>0.05),但1,3组肉鸡21,42天血清P含量分别比对照组增加2.05%、6.15%和4.41%、12.33%,而血清ALP活性分别降低13.83%、9.11%和5.52%、13.99%。

摘要：为了对罗斯308(Ls308)肉鸡白细胞介素2(IL-2)基因进行生物信息学分析,试验根据GenBank中已登录的鸡IL-2 mRNA基因序列,设计1对特异性引物,采用RT-PCR方法成功克隆Ls308肉鸡的IL-2基因。结果表明:Ls308肉鸡IL-2基因CDS区全长为432 bp,含有1个432 bp开放阅读框(ORF),编码143个氨基酸,该基因序列与Gen Bank中登录的鸡、丝毛鸡、印度肉鸡、来航鸡、野猪、狼、猫、牛、人、羊的IL-2核苷酸序列同源性分别为97.2%、99.8%、98.6%、100%、27.5%、31.7%、27.8%、30.3%、30.3%、30.3%,与其氨基酸序列同源性分别为98.6%、99.3%、97.9%、100%、10.5%、10.5%、9.1%、8.4%、10.5%、8.4%。该蛋白理化性质分析结果表明,该蛋白分子质量为16 429 ku,理论等电点(PI)为5.66,分子式为C728H1178N184O225S10,由20种常见氨基酸组成,其中带负电荷的氨基酸(Asp+Glu)占14.0%,带正电荷的氨基酸(Arg+Lys)占11.9%。该蛋白的半衰期为30 h,不稳定系数为41.70,为不稳定蛋白;该蛋白脂溶性为92.03,平均亲水指数为-0.294,该蛋白为亲水蛋白。信号肽预测结果表明,该蛋白N端有信号肽,信号肽位置为前22个氨基酸,说明其分泌蛋白;跨膜区预测结果表明,该蛋白含有一个跨膜区域,预测其为跨膜蛋白;二级结构中以α螺旋和无规则卷曲为主,延伸链和β转角只是在局部出现;三级结构与二级结构预测结果一致,亚细胞定位显示该蛋白可能主要在细胞膜上发挥作用。

摘要：为分析柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)河北株SO7基因序列遗传变异性,试验根据GenBank发表的SO7序列设计引物,利用RT-PCR技术克隆出柔嫩艾美耳球虫河北株SO7基因,将SO7基因克隆入pMD18-T载体中,进行测序、序列分析及表达蛋白结构的预测。结果显示:柔嫩艾美耳球虫河北株SO7基因编码215个氨基酸,具有一个开放阅读框,大小为645 bp;与GenBank中发表的美国分离株(LS18)、扬州分离株(YZ)、海南分离株(HN)、广东分离株(GD)、北京分离株(BJ)SO7核苷酸序列的同源性分别为99.4%、99.5%、99.7%、99.5%、99.4%,所推导的氨基酸序列的同源性分别为98.6%、99.1%、99.1%、98.6%、98.1%。从进化关系来看,同种间SO7基因相比,柔嫩艾美耳球虫河北株与HN株同属一个分支,遗传关系较近;与GD株、BJ株的遗传关系相对较远。蛋白结构预测显示蛋白的相对分子质量为52.20 ku,理论等电点(PI)为5.08,不稳定系数为52.73,为不稳定蛋白;在1~20个氨基酸具有信号肽;有5个疏水位点;没有跨膜结构。综上所述,柔嫩艾美耳球虫河北株SO7基因序列遗传变异性不明显,可以作为构建核酸疫苗候选基因。

摘要：本研究旨在检测河北省滦县牛梨形虫的感染情况。采集滦县牛血液样本28份,并提取基因组DNA;根据已发表的梨形虫Tams1,P32表面蛋白以及18S rRNA基因序列,设计6对梨形虫特异性引物,以牛血液基因组DNA为模板,对不同梨形虫进行PCR或巢式PCR扩增。结果表明,在28份DNA样本中检测出双芽巴贝斯虫阳性样本7份,阳性率为25.00%;其他牛巴贝斯虫阳性样本3份,阳性率10.71%;而环形泰勒虫和瑟氏泰勒虫均未检测到阳性样本。

摘要：为检测河北省新乐市羊梨形虫的感染情况,采集河北省新乐市羊血液样本31份,并提取基因组DNA;根据梨形虫18S rRNA基因序列设计5对特异性引物,以羊血液基因组DNA为模板,对梨形虫进行巢式PCR扩增。结果表明,在31份DNA样本中检测出4份吕氏泰勒虫(12.9%),而尤氏泰勒虫、中华泰勒虫和羊巴贝斯虫均未检测到阳性样本。