摘要：通过对多种鸡球虫和松鼠球虫18SrRNA和28SrRNA进行序列比对分析,在18SrRNA 3′端和28SrRNA 5′端保守区设计艾美耳属通用引物,以斯氏艾美耳球虫洛阳分离株LY卵囊基因组DNA为模板首次成功克隆到斯氏艾美耳球虫完整的ITS1-5.8SrRNA-ITS2序列,其大小为1 178bp,其中ITS1序列长度为423bp,5.8SrRNA为155bp,ITS2为600bp,斯氏艾美耳球虫LY株ITS1/2序列高度变异,与鸡球虫、啮齿动物球虫的序列相似性低于60%。然后在斯氏艾美耳球虫ITS1/2序列超变区设计种特异引物,建立了灵敏、特异的PCR检测方法。本研究结果将为兔球虫强致病种的临床诊断和揭示兔球虫种群遗传特征提供有效的分子工具。

摘要：为检测鸡胚中贝氏隐孢子虫,本研究根据GenBank公布的贝氏隐孢子虫和原鸡18SrRNA基因序列设计针对贝氏隐孢子虫的特异性引物,并以贝氏隐孢子虫卵囊基因组DNA为模板,建立检测贝氏隐孢子虫SYBR Green实时荧光定量PCR(Real-time qPCR)方法,同时对贝氏隐孢子虫在鸡胚中培养7d后尿囊膜和尿囊液样品中虫体DNA进行检测。结果表明,建立的SYBR Green real-time qPCR方法可特异性检测到贝氏隐孢子虫,建立的标准曲线线性关系良好(R2=0.998),卵囊基因组DNA检测阈值为10个卵囊,重复检测结果显示试验重现性较好。该方法成功检测到尿囊膜和尿囊液中虫体DNA。本研究建立了快速、特异的定量检测鸡胚中贝氏隐孢子虫real-time qPCR方法,可用于对贝氏隐孢子虫在鸡胚中繁殖规律分析和抗隐孢子虫药物筛选等研究。

摘要：设计3个不同剂量的鸭源隐孢子虫试验感染2日龄雏鸡,通过临床症状、增重、排卵囊规律和法氏囊指数及寄生器官组织扫描电镜观察,证实贝氏隐孢子虫160万个卵囊感染即可引起明显的呼吸道症状,发病鸡增重显著降低,法氏囊严重萎缩。贝氏隐孢子虫致病程度和排卵囊规律与感染剂量相关,主要病变表现呼吸道病变和法氏囊炎症。

摘要：传统mRNA差异显示技术针对真核细胞mRNA3′端poly(A)尾设计12种两个锚定碱基的Oligo(dT)引物(第1位碱基不为A),将不同的mRNA反转录成cDNA;同时在5′端设计20种10bp随机引物,这样构成的引物对可扩增出大体涵盖一定发育阶段某种细胞类型中所表达的全部mRNA,经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,对比挑选差异表达片段。该技术具有简便、快速、RNA用量少、可同时比较多个样品、灵敏度高等优点,其主要不足是假阳性率较高。经不断优化反应条件,显著降低了假阳性的出现。目前该方法广泛应用于医学、动植物分子生物学等研究领域,用以检测差异表达基因和分离新基因、新特异性序列标签,研究动植物发育,检测遗传变异等。

摘要：目的为快速检测微小隐孢子虫,建立并优化了以SYBR Green I显色的环介导等温扩增快速检测隐孢子虫的方法。方法根据微小隐孢子虫18SrRNA基因的4条特异LAMP引物,设计2条环引物,建立了微小隐孢子虫LAMP检测方法。结果该方法省去95℃热变性和80℃酶失活过程,其最佳反应温度和时间是63℃和60min,Betaine、MgSO4、dNTP Mixture、Bst DNA聚合酶大片段的最佳浓度分别是0.8mol/L、8mmol/L、0.8mmol/L、8U/25μL,内外引物浓度分别为1.2μmol/L、0.2μmol/L,添加环引物后体系反应时间缩短为20min。对贾第虫、肠阿米巴、柔嫩艾美耳球虫、类圆线虫检测为阴性。该方法简便、快速,无需特殊设备。结论和常规PCR方法比较,LAMP检测隐孢子虫的灵敏度提高了100倍。该方法的建立为野外和临床隐孢子虫的快速检测提供技术手段。

摘要：鸡球虫病目前仍然是困扰养禽业的一个主要问题,肉鸡和蛋鸡群经常发生球虫病,造成严重损失。为此,设计以Diclazuril(商品名Clincox,0.5％含量)为中心的“穿梭”用药程序,经过在河南省郑州、洛阳、平顶山、南阳、许昌、漯河、安阳、新乡、焦作等地区部分鸡场近2年的推广应用,取得较好效果,使用该程序的鸡场鸡球虫病基本得到控制。现将平顶山汝州市某大型鸡场在1994年8月至1997年10月期间使用该程序前后鸡球虫感染及鸡球虫病发病情况总结如下:

摘要：为建立荧光定量PCR方法检测嗜吞噬细胞无浆体（Anaplasma phangocytophilum），针对GenBank *** 16S rRNA基因保守序列（JN558815），设计1对引物1—25F／183—205R。以已知引物EE1／EE2和该引物进行巢式PCR扩增出预期大小片段（205bp），构建合有16srRNA基因的重组质粒，以质粒为模板构建了标准曲线。以1—25F／183—205R为荧光定量PCR引物，建立*** philum荧光定量PCR检测方法，并进行特异性、敏感性、重复性试验和临床样本检测。结果表明，该方法在6．4×10^3～6．4×10^8copies／μL相关系数为0．99，显示出良好的线性关系；所建方法能特异地检出***，对绵羊无浆体、牛无浆体和环形泰勒虫基因组DNA和灭菌双蒸水均无交叉反应；可检测到6．4×10^2copies／μL的标准质粒DNA，比常规PCR敏感性高100倍；批内及批间变异系数均低于2．0％，具有较高的重复性和稳定性；利用该方法对30份羊血液临床样品检出率比巢式PCR高16．67％。该研究为***临床检测和定量分析病原感染程度奠定理论基础。

摘要：为研制长久持效的硬蜱驱避剂,依据驱蚊酯的理化特性,以驱蚊酯为有效成分、无水乙醇为溶剂、α-吡咯烷酮为稳定剂、聚乙二醇-400(PEG-400)为增黏剂,分别以聚乙烯吡咯烷酮(PVP-K30)、羧甲基纤维素钠(CMC-Na)、麦芽糊精为缓释成分进行多种溶剂系统组合,设计4个驱蚊酯含量为20%的驱避剂原药配方,并进行系列稳定性试验,对配方进行筛选,并对筛选出的配方进行相关含量测定。结果表明,采用5%~20%的聚乙烯吡咯烷酮、5%~20%的α-吡咯烷酮、5%~20%的聚乙二醇-400、30%的无水乙醇为组成成分的原药配方具有最好的稳定性。利用气相色谱法测定制剂中驱蚊酯的含量,所制备的驱蚊酯长效驱避剂的平均日内精密度为0.59%,平均日间精密度为0.49%,平均回收率为97.4%,3个批次的驱蚊酯长效驱避剂含量均介于标示量的98.1%~103.8%。综上,制备的驱蚊酯长效驱避剂工艺简单,稳定性好,可重复性高。

摘要：建立了人源隐孢子虫动物感染模型,确定人源隐孢子虫在模型动物体内的寄生部位及组织病理学变化,以小鼠为接种对象,设计不同接种剂量,于接种后不同时间段剖杀小鼠.结果表明,免疫抑制组和非免疫抑制组均能感染隐孢子虫,使用免疫抑制剂组均能有效建立起隐孢子虫动物感染模型;人源隐孢子虫寄生在小鼠的十二指肠、空肠和回肠,在感染早期主要寄生在空肠和回肠,在感染中后期主要寄生在十二指肠和空肠,在虫体寄生部位有典型的组织学变化.

摘要：用黄艾美耳球虫重复免疫２月龄新西兰品种无球虫兔，设计３种免疫程序：（１）均等中剂量，免疫３次，间隔１０ｄ，２０００个卵囊／只·次；（２）均等低剂量，免疫５次，间隔５ｄ，２００个卵囊／只·次；（３）加倍递增剂量免疫程序，免疫５次，间隔５ｄ，起始剂量为２００个卵囊／只·次。在３００００个孢子化卵囊攻虫后的１７ｄ，对所有实验动物各段肠道取样，用扫描电镜进行观察，结果发现，家兔各段肠道杯状细胞分泌旺盛，可见到大量的分泌物，粘液团块及由粘液所形成的假膜覆盖在肠粘膜表面。在肠粘膜表面见到较多的大肠杆菌。小肠肠绒毛萎缩、变短、有的胀肿，大肠肠粘膜表面的纵行皱折萎缩。相比而言，低剂量免疫的家兔小肠肠绒毛萎缩和大肠粘膜的纵行皱折萎缩均较严重，而且有较严重的卡他性肠炎。中剂量和加倍递增剂量免疫的家兔病变程度较接近。