摘要：目的对用表达序列标签(EST)策略从日本血吸虫(Schistosomajaponicum)尾蚴cDNA文库中筛选出的新基因进行全长cDNA克隆及功能预测。方法将插入于pTriplEx2 质粒上的cDNA进行测序,测序结果经BLASTn程序搜索,发现该插入cDNA序列与曼氏血吸虫真核生物翻译起始因子2α亚基(eukaryotic translation initiation factor 2 alpha subunit, eIF2α) 基因高度同源。根据该EST序列设计与pTriplEx2 质粒上的5'端测序引物相匹配的PCR下游引物,从该cDNA文库中扩出包含eIF2α全长ORF的cDNA片段。将PCR产物纯化后克隆到pGEM-T载体上,并对此克隆进行测序得到其全长cDNA序列。用NCBI 站点的BLASTx及BLASTn程序对所获得的新基因序列进行同源性搜索;用blast two sequence程序对同源性高的基因进行核苷酸及氨基酸水平的同源性比较。同时用网上分析软件进行基序和保守区域的搜索。结果发现一个与曼氏血吸虫eIF2α亚基mRNA高度同源的日本血吸虫新基因,核苷酸与氨基酸水平的同一性分别为87%和79%,编码由327个氨基酸组成的蛋白序列。结论用EST策略筛选到一个日本血吸虫新基因,编码eIF2α亚基,全长编码序列与曼氏血吸虫eIF2α亚基mRNA高度同源。

摘要：目的克隆、原核表达中华按蚊的防御素基因,并对其表达产物的生物学活性进行评价。方法根据已发表的埃及伊蚊和冈比亚按蚊防御素基因序列设计合成两对引物,以中华按蚊成蚊cDNA为模板进行PCR扩增,将预期片段克隆测序并进行分析;根据表达质粒pET32a(+)上的克隆位点及测序结果设计PCR引物,将截短的基因片段重组入质粒pET32a(+)中进行表达,纯化表达产物并进行体外抑菌试验。结果PCR扩增产物大小约270bp,目的基因的序列与冈比亚按蚊防御素基因同源性为85%;截取其保守功能区域序列(162bp),构建成功重组表达质粒pET32a(+)-tDEF,含重组质粒的转化菌用IPTG诱导表达后,于Mr26000处可见一预期的特异表达带,该蛋白与抗6-His抗体有特异性的反应;琼脂扩散法显示,纯化的重组防御素融合蛋白未出现抑菌环。结论首次克隆了中华按蚊防御素基因,其截短片段在大肠杆菌中得到了高效可溶性表达,但重组融合蛋白不具备抑菌活性。

摘要：目的克隆日本血吸虫8kCaBP(Sj8CaBP)基因启动子区并对该序列进行分析。方法提取日本血吸虫基因组DNA,并按ClontechUniversalGenomeWalkerTMKit的操作手册说明,建立日本血吸虫基因组DNA文库。根据手册要求及Sj8CaBP基因的cDNA序列,设计合成该基因染色体步移的特异性引物与试剂盒提供的端子引物进行巢式PCR。将得到的PCR产物克隆测序,测序结果用启动子区的分析软件及与其cDNA序列比对进行分析。结果得到的Sj8CaBP基因长度为1079bp(GenBank登录号AY262018),该基因包含Sj8CaBP基因完整的开放阅读框(ORF),包括1个内含子及2个外显子,在其5'端UTR区具有明显的启动子区,包括TATA盒及CAAT盒,没有发现GC盒及一些血吸虫基因启动子区所常见的AP-1(Activeprotein1)结合位点。结论从日本血吸虫基因组文库中获得一个长1079bp的Sj8CaBP基因片段(GenBank登录号为AY262018),经分析证明,该片段包含一个启动子区,具有TATA盒及CAAT盒的结构及1个内含子2个外显子.

摘要：目的将用表达序列标签(expression sequence tag, EST)策略及同源性搜索发现的日本血吸虫新基因——腺苷酸激酶(adenylate kinase,AK)cDNA克隆到表达质粒pET32a(+)上,为下一步研究该基因的功能做准备。方法将插入于pTriplEx2 质粒上的cDNA进行测序,用BLASTn程序搜索测序结果,根据表达质粒pET32a(+)上的克隆位点及该cDNA序列设计PCR引物,将PCR产物纯化后连接到pMD 18-T载体上,将重组T载体经EcoRⅠ/XhoⅠ双酶切后切下的SjAK基因导入原核可溶性表达质粒pET32a(+)中。结果本研究所发现的新基因与曼氏血吸虫AK基因的同一性达86%,PCR产物的片段长度与预期大小一致,重组T载体及表达质粒经EcoR I及XhoI双酶切后证明具有与目标片段长度相符的插入片段。结论发现日本血吸虫的cDNA与曼氏血吸虫AK cDNA高度同源,并且成功地构建出重组表达质粒pET32a(+)-SjAK。

摘要：目的将用EST策略及同源性搜索发现的日本血吸虫新基因——蛋白酶体激活因子PA28亚单位（proteasome activatorPA28 subunit,PA28）cDNA克隆到表达质粒pET32a（+）上,为下一步对该基因进行功能研究做准备。方法将插入于pTrip1Ex2质粒上的cDNA进行测序,测序结果经BLASTx程序搜索,发现该插入cDNA序列所编码的蛋白与小鼠肌肉内的PA28亚基蛋白高度同源。根据表达质粒pET32a（+）上的克隆位点及该cDNA序列设计PCR引物,将PCR产物纯化后连接到pMD 18-T载体上,将重组T载体经EcoRI/XhoI双酶切后切下的SjPA28基因导入原核可溶性表达质粒pET32a（+）中。结果所发现的cDNA所编码的蛋白与小鼠肌肉内的PA28亚基蛋白的同一性达41％,PCR产物的片段长度与预期大小一致,重组T载体及表达质粒经EcoRI/XhoI双酶切后证明具有与目标片段长度相符的插入片段。结论本研究所发现的cDNA所编码的蛋白与小鼠肌肉内的PA28亚基蛋白高度同源,并且已成功地构建出重组表达质粒pET32a（+）-SjPA28。

摘要：目的　构建弓形虫棒状体蛋白 2 (ROP2 )基因重组质粒。方法　根据ROP2基因已知序列 ,设计合成一对引物 ,用PCR方法从弓形虫RH株基因组DNA中扩增编码ROP2的基因片段 ,插入pGEX 4T 1质粒 ,转化大肠杆菌TG1感受态细胞 ,经酶切及PCR鉴定 ,而后进行测序。结果　ROP2基因体外扩增产物大小约 10 43bp ,重组质粒经酶切及PCR鉴定表明获得正确重组子 ,测序结果与已知序列基本吻合。结论　在国内首次克隆了弓形虫ROP2基因 ,为下一步弓形虫诊断及疫苗研究打下了基础。

摘要：混合式教学(Blended Teaching)是一种基于计算机网络环境的教学模式,把传统教学与网络化教学的优势结合起来,既发挥教师引导、启发、掌握教学过程的主导作用,又体现学生为学习过程主体的主动性、积极性与创造性。为配合医学寄生虫学混合式教学,在预防医学相关专业及医学实验技术专业开展混合式实验教学研究,通过课堂设计、教学实践、问卷调查及考核成绩分析,比较在混合式实验教学与传统实验教学模式下医学寄生虫学实验教学的效果。分析结果显示:与传统实验教学相比,混合式实验教学的学生接受度更高,提高了医学寄生虫学的实验课成绩和学生自主学习能力,为全面开展医学寄生虫学混合式实验教学建立了方法和基础。

摘要：目的克隆我国重要蚊媒的防御素基因并对其序列进行分析。方法分别提取埃及伊蚊、白纹伊蚊、致乏库蚊、中华按蚊的基因组DNA和总RNA。根据国外已发表的防御素基因序列设计、合成引物,进行PCR和RT-PCR。结果分别从埃及伊蚊、白纹伊蚊、中华按蚊基因组DNA中扩增出预期片段,将片段切胶纯化后进行序列分析并与已发表的防御素基因比较,显示埃及伊蚊和白纹伊蚊的扩增片段与已发表的防御素基因序列有很高的同源性,而中华按蚊的扩增片段则与已发表的防御素基因序列的同源性较低,且不具备特征性的6 个半胱氨酸序列。结论克隆出埃及伊蚊和白纹伊蚊的防御素基因,蚊虫防御素基因的同源性高低与其遗传分类距离有一定的平行关系。

摘要：目的　将用EST策略及同源性搜索发现的日本血吸虫新基因—Ⅲ 8kDa钙结合蛋白 (Calcium -bindingprotein ,CBP)cDNA克隆到表达质粒pET32a(+)上 ,为下一步对该基因的功能进行研究做准备。方法　将插入于pTriplEx2质粒上的cDNA进行测序 ,测序结果经BLASTn程序搜索 ,发现该插入cDNA序列与曼氏血吸虫钙结合蛋白cDNA高度同源。根据表达质粒pET32a(+)上的克隆位点及该cDNA序列设计PCR引物 ,将PCR产物纯化后连接到pMD 1 8-T载体上 ,将重组T载体经EcoRI/XhoI双酶切后切下的SjCBP基因亚克隆入原核可溶性表达质粒pET32a(+)中。结果　所发现的新基因与曼氏血吸虫 8kDaCBP基因的同源性达 82 % ,PCR产物的片段长度与预期大小一致 ,重组T载体及表达质粒经EcoRI及XhoI双酶切后证明具有与目标片段长度相符的插入片段。结论　所发现的cDNA与曼氏血吸虫 8kDaCBPcDAN高度同源 ,并且已成功地构建出重组表达质粒pET32a(+) -SjCBP。

摘要：在数字化时代的慕课背景下,如何将传统的线下课堂教学与线上慕课教学有机结合,探索适合医学院校和课程自身特色的混合式教学模式,切实提高教学质量,是当前教学中亟待解决的重要问题。我们在医学寄生虫学课程“线上+线下”混合式教学过程中,以“让学生忙起来、让教学活起来”为目标,通过优质教学活动的设计与实践,建立了基于MOOC的大班与小班混合式教学模式,改善了教学效果。为培养具备寄生虫病诊防治能力的医学人才,建设一流课程的教学改革提供了重要参考。