摘要：合肥野生动物园救助一例野生白鹤,在对该白鹤进行粪便检查时发现球虫卵囊,初步判定为艾美尔球虫;使用分子生物学的方法,根据GenBank中已发表的不同物种球虫的ITS-1基因(间隔转录区-1)序列采取同源性比对,取其保守区域设计特异性引物,建立白鹤球虫种的PCR鉴定方法,结果表示该方法可以从白鹤球虫卵囊样本中扩增出539bp大小片段,与预期结果相同,同源性分析显示:该球虫分离株ITS1基因与其他球虫毒株的核苷酸同源性都在77%~96%之间,遗传进化树分析显示:所分离的白鹤球虫(Grane eimeria)和Eimeria gruis最接近,但不在一个分支上。由此可见,白鹤球虫与其他物种球虫不是同一种类,是一个新种。感染白鹤球虫种类较多,种类的确定有助于该病的预防和控制。

摘要：根据已有的伯氏疏螺旋体鞭毛基因序列,设计两条特异性引物,PCR扩增该基因,并获得基因全长序列,大小为1 008 bp。采用生物信息学技术,对所获得的伯氏疏螺旋体鞭毛基因序列和拟编码的蛋白序列进行分析,发现其编码336个氨基酸,编码蛋白的理论分子量为35.7 ku,等电点为5.53,具有多个抗原表位序列,其中编码主要抗原位点的片段位于中央区段,该中央区段还具有伯氏疏螺旋体种的保守性。伯氏疏螺旋体鞭毛基因中央区段编码蛋白既是主要的抗原位点又具有保守性,理论上可作为莱姆病的诊断抗原。本文为莱姆病的实验室诊断奠定基础。

摘要：采用饱和蔗糖漂浮法、改良抗酸染色法和孢子化试验首次从广东某猴场的猴粪中分离到疑似环孢子虫卵囊。为了对其进行分子鉴定,采用巢式PCR和普通PCR方法,针对环孢子虫属18SrDNA和ITS基因设计了3对引物,扩增其目的片段,并进行了序列分析。结果显示,卵囊大小为7.5～10μm,经改良抗酸染色的卵囊染色程度不一,孢子化卵囊内含2个孢子囊,每个孢子囊内含有2个子孢子。通过PCR扩增,获得的18SrDNA目的片段长712bp,测序结果表明该猴源环孢子虫18SrDNA基因与Cyclosporacolobi、狒狒环孢子虫、人环孢子虫的相似率较高,在进化树上位于同一分支。获得的ITS-1+片段长760bp,其中ITS-1序列高度特异,在GenBank中未见同源性序列。结果表明,从猴粪中分离的疑似环孢子虫卵囊应属于环孢子虫。

摘要：为推进教学创新,深化以学生为主体的教学模式的改革,我们在动医、动检专业《兽医公共卫生学》的教学过程中实施案例教学。通过案例选编、问题设计、课堂交流、归纳总结四个实践环节,最后以问卷调查形式由学生对案例教学效果进行评价。结果显示,总体评价优良占87.69%,表明该教学法能有效激发学生的学习积极性,加深对理论知识的理解与运用,增强学生的综合素质,培养学生从事兽医公共卫生实际工作的能力,同时还能提高教师的专业素养,这将为预防兽医学教学改革工作的顺利开展提供借鉴。

摘要：[目的]探索以蔗糖溶液作为介质分离纯化隐孢子虫卵囊的最佳条件。[方法]以隐孢子虫感染阳性奶牛粪样为材料,设计5个蔗糖浓度、3个离心时间和3个离心速度进行隐孢子虫卵囊的分离纯化。[结果]蔗糖浓度为1∶2.0和12∶.5时,分离出的卵囊总数极显著大于其他3组(P0.05),其中离心20 min时卵囊平均数最大;不同离心速度分离出的卵囊总数的比较表明,3 000 r/min得到的卵囊数量最多。[结论]蔗糖浓度为12∶.5、离心速度为3 000 r/min、离心时间为20 min是隐孢子虫卵囊分离纯化的最佳条件。

摘要：目的研制禽类贝氏隐孢子虫的PCR检测试剂盒。方法根据贝氏隐孢子虫18SrRNA和ITS-1序列,选取遗传标记位点最多的一段核苷酸序列作为特异PCR引物的靶序列,设计、合成了一对针对贝氏隐孢子虫的特异性引物(YJWF:5’-ACTGATATACAATACCACGG-3’和YR:5’-GCGGATAAAGTTCAGGTTC-3’),对PCR反应条件进行了一系列优化,并分别对试剂盒的特异性、敏感性、稳定性、重复性和保存期等进行了系列研究。结果该试剂盒能特异性地扩增出贝氏隐孢子虫基因组中相应片段,与安氏隐孢子虫,微小隐孢子虫,柔嫩艾美尔球虫等相关原虫基因组DNA无交叉反应;最低能检测到3.48个卵囊;反复冻融50次对试剂盒没有影响;室温条件下至少可保存4个月。结论该试剂盒的各项指标达到了贝氏隐孢子虫的检测要求。

摘要：目的 建立高效检测刚地弓形虫（Toxoplama gondii）的环介导等温扩增（LAMP）方法，为弓形虫病诊断提供新的技术手段。 方法 采用在线引物设计软件Primer Explorer 4.0设计弓形虫529 bp基因LAMP扩增引物，用已构建的pMD-19T-529 bp重组质粒为模板，建立LAMP扩增反应，通过添加环引物、设置不同浓度的甜菜碱和MgSO4以及不同反应温度对扩增反应体系和反应条件进行优化。以猪、微小隐孢子虫（Cryptosporidium parvum）、猪等孢球虫（Isospora suis）的基因组DNA和超纯水为对照，pMD-19T-529 bp重组质粒为模板，分别进行优化后的LAMP和PCR扩增，评价LAMP方法的特异性。将pMD-19T-529 bp重组质粒梯度稀释为109~100 copies/ml，分别进行优化后的LAMP和PCR扩增，评价LAMP方法的灵敏性。 结果 设计的LAMP扩增引物可扩增出弓形虫529 bp序列保守区域的目的片段。优化结果显示，最佳反应总体系为25 μl，其中，甜菜碱最佳浓度为0.4 mol/L，MgSO4最佳浓度为6 mmol/L；添加环引物反应30 min的扩增效率与未添加环引物反应60 min的扩增效率相当，可使反应时间缩短30 min；最佳反应条件为63 ℃ 30 min，80 ℃ 3 min。特异性检测结果显示，所建立的LAMP方法可特异扩增弓形虫529 bp基因片段， 对照均未扩增出目的片段。灵敏性检测结果显示，LAMP方法的最低检出值达103 copies/ml，效率为PCR扩增（104 copies/ml）的10倍。 结论 建立了弓形虫529 bp重复序列的LAMP检测方法，该法具有较好的特异性和灵敏性。

摘要：为探究不同发育时期弓形虫棒状体颈部蛋白5(Toxoplasma gondii rhoptry neck protein 5,TgRON5)基因的表达情况与其毒力的相关性,本试验以Ⅱ型弓形虫PRU虫株作为研究对象,以弓形虫管家基因ACT1作为内参基因,分别对目的基因和内参基因设计特异性引物,通过对各基因建立标准曲线,确定二者扩增效率的一致性后,采用实时荧光定量PCR相对定量法对弓形虫4个不同发育时期(速殖子、缓殖子、未孢子化卵囊及孢子化卵囊)中TgRON5基因的表达情况进行检测与分析。结果显示,TgRON5基因在弓形虫各发育时期均有表达,其中,孢子化卵囊表达水平最高,未孢子化卵囊次之,速殖子较低,缓殖子最低,表明RON5蛋白的合成与分泌与虫体入侵宿主细胞的侵袭力有着密切的关系。本研究结果为阐明TgRON5蛋白参与弓形虫入侵的机理奠定了基础。

摘要：[目的]对猪流行性腹泻病毒安徽毒株AH-2018-HF1进行全基因组测序,了解该毒株的分子生物学特征和遗传进化情况,为PEDV的进化和变异研究提供参考。[方法]从PEDV阳性病料(肠道组织)中提取RNA,反转录获得cDNA。将PEDV基因分为9段,设计相应的引物,采用分段重叠法对PEDV基因组进行分段扩增,扩增产物经克隆测序后,采用DNAstar软件拼接,获得全基因组,将此全基因序列与GenBank上公布的国内外25株PEDV毒株进行比对和分析。[结果]PCR扩增获得了4036,3724,2874,3600,3950,4187,3576,2953和1138 bp的9条目标片段,测序拼接后获得了27937 bp的PEDV全长基因组。AH-2018-HF1株与经典株CV777(疫苗株)全基因序列同源性为97.7%,S基因同源性为96.7%,ORF3基因同源性为90.8%。全基因组序列对比发现,AH-2018-HF1株与SD-M株同源性最高,为99.9%;与PEDV/MEX/QRO/02/2017同源性最低,为96%。S基因序列分析结果显示,AH-2018-HF1株在2319-2320位缺失3 bp碱基(GTT);与CV777、LZC株相比,AH-2018-HF1株在459-460位缺失3 bp碱基(ATA);和国内外变异毒株相比,AH-2018-HF1株在174-175位缺失12 bp碱基(CAGGGTGTCAAT),在461-462位插入6 bp碱基(TGGAAA)。ORF3基因序列分析结果显示,AH-2018-HF1株在245-296位有49个碱基缺失。全基因组系统进化树分析表明,AH-2018-HF1与SD-M亲缘性最近,与CV777亲缘性较近,与国内外变异毒株的亲缘关系较远;S基因系统进化结果与全基因组系统进化结果相似;ORF3基因系统进化分析结果与全基因组系统进化结果不同。[结论]AH-2018-HF1仍属于经典毒株,但存在一定的变异,表明PEDV处于不断的进化中。

摘要：为探明猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)N基因编码的蛋白对PEDV感染早期诊断的作用,根据PEDV CV777株N基因全序列设计一对特异性引物以扩增N基因,定向插入到pPM-CHis真核表达载体中构建重组表达质粒pPM-C-His-N,将重组质粒肌肉注射昆明系小鼠,以检测其在小鼠体内的表达水平;将pPM-C-His-N转染至Vero细胞,分别在基因水平和蛋白水平对N基因的表达进行检测,并采用间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)检测N蛋白在细胞中的表达分布情况。结果表明,重组质粒在基因水平和蛋白水平均成功表达,免疫小鼠血清中抗体的效价为1∶51 200,Western-blot结果显示,免疫血清能与重组N蛋白发生特异性反应,说明实验成功构建了重组真核表达质粒pPM-C-His-N,且在Vero细胞内检测到了绿色荧光,为PEDV诊断方法的建立及致病机制的研究奠定基础。