摘要：背景:白细胞介素6、骨钙素和骨碱性磷酸酶均参与骨代谢过程,其与骨质疏松的发生有相关性。目的:观察白细胞介素6、骨钙素和骨碱性磷酸酶在骨质疏松大鼠中的表达特征。设计:随机分组观察对比实验。单位:深圳市人民医院(暨南大学医学院第二附属医院)骨科。材料:实验于2002-01/2003-01在深圳市人民医院动物实验室及中心实验室完成。6月龄雌性SD大鼠60只,平均体质量250g,随机分为3组:去势组,对照组,空白组,每组20只。方法:去势组手术切除大鼠双侧卵巢建立骨质疏松动物模型;对照组开腹后将卵巢提出腹腔后还纳关腹;空白组不行任何处理。分别于术后2,3,4,5,6个月后每组随机抽出大鼠4只,进行骨密度、骨钙素、白细胞介素6及碱性磷酸酶检测。主要观察指标:大鼠全身骨密度、血清骨钙素、血清白细胞介素6及血清骨碱性磷酸酶变化。结果:60只大鼠均进入结果分析。①大鼠骨密度测量结果:4,5,6个月去势组骨密度较对照组和空白组明显下降犤4个月:(0.1395±0.0078),(0.1470±0.0008),(0.1459±0.0029)g/cm2,5个月:(0.1379±0.0009),(0.1456±0.0008),(0.1447±0.0005)g/cm2,6个月:(0.1226±0.0004),(0.1450±0.0021),(0.1440±0.0009)g/cm2,P0.05)。③大鼠白细胞介素6检测结果:各时间点去势组白细胞介素6均显著高对照组与空白组(P>0.05)④大鼠血清骨碱性磷酸酶:4,5,6个月去势组骨碱性磷酸酶显著高于对照组与空白组犤(2026±4)比(1247±12),(1291±7)nkat/L,(2342±9)比(1273±18),(1342±12)nkat/L,(2633±15)比(1340±9),(1357±8)nkat/L,P<0.05犦结论:在骨质疏松症大鼠中骨密度显著降低,白细胞介素6、骨钙素和骨碱性磷酸酶在骨质疏松症大鼠中有显著表达,可作为骨质疏松症的诊断及筛查指标。

摘要：背景:SOX-9在软骨组织的发生和发育中具有重要作用,可促进间充质细胞凝集,具有转录激活结构域,能直接调控转录。目的:选用SOX-9基因构建pDC316-SOX-9质粒转染兔骨髓基质细胞,观察SOX-9基因对骨髓基质细胞生长特性及产物表达的影响。设计、时间及地点:细胞基因工程体外实验,于2006-06/2007-01在中国科学院北京基因组研究所完成。材料:SPF级6周龄新西兰大白兔8只,用于分离培养骨髓基质细胞。方法:采用脂质体介导法将构建的pDC316-SOX-9质粒转染兔骨髓基质细胞,细胞转染分为SOX-9质粒转染组、空质粒组、只加入等量脂质体的空白对照组。主要观察指标:通过细胞形态、细胞生长活性、免疫组织化学及HE染色、RT-PCR法、ELISA法检测SOX-9基因转染骨髓基质细胞是否成功。结果:pDC316-SOX-9质粒转染4d出现小片的细胞集落,挑取克隆扩增培养后,细胞呈梭形纤维状。随转染时间的延长,空白对照组细胞逐渐死亡,SOX-9质粒转染组、空质粒组的细胞活性均显著延长,在转染2周达高峰,之后逐渐降低。转染第6天,SOX-9质粒转染组骨髓基质细胞免疫组织化学染色呈棕黄色,稳定表达SOX-9蛋白,HE染色可见多个双核细胞,细胞增殖旺盛,与成软骨细胞类似;空质粒组无SOX-9蛋白表达,组胞增殖分裂不旺盛。SOX-9质粒转染组表达SOX-9 mRNA,空质粒组及空白对照组均无SOX-9 mRNA表达。转染后24,48,72h及1,2周,SOX-9质粒转染组细胞上清液中SOX-9含量均明显高于空质粒组、空白对照组(P<0.01)。结论:利用pDC316-SOX-9质粒成功转染兔骨髓基质细胞,增强细胞生长活性,并能持续稳定的分泌SOX-9蛋白,可诱导骨髓基质细胞向软骨方向分化。

摘要：背景：骨髓基质细胞的分离纯化、细胞培养、细胞标记、诱导因子、基因转染对细胞生物学影响、细胞载体构建及细胞复合物回植时间的选择等尚处于实验研究阶段。目的：摸索一种较为简便且可有效获得骨髓基质细胞的体外培养方法。设计、时间及地点：细胞学体外实验，于2006—06／2007-01在中国科学院北京基因组研究所完成。材料：SPF级6周龄新西兰大白兔8只，由中国科学院遗传发育研究所实验动物中心提供。方法：无菌条件下抽取兔骨髓1mL，***液稀释后，离心弃上清，DMEM培养基重悬，制备单细胞悬液，叠加在密度为1．077的等体积淋巴细胞分离液的液面上，离心后取界面云雾状的单个核细胞层，用含有20％胎牛血清的DMEM培养基重悬。以1×10／cm^2接种后贴壁法纯化细胞，待70％～80％长满单层后消化传代。主要观察指标：倒置显微镜下观察细胞生长情况，锥虫蓝染色计数活细胞，苏木精．伊红染色对细胞进行鉴定，MTT法检测细胞活性，观察传代培养的细胞冻存后复苏情况。结果：接种24h后细胞开始贴壁，呈短梭形或三角形，且有长短不等的细胞突起：3d后贴壁细胞开始分裂增殖，部分区域形成细胞团簇；1周后大部分细胞呈成纤维状散落在培养瓶底生长；传代后细胞均匀分布，形态呈细长梭形，并沿一定方向排列，1mL骨髓基质细胞悬液传3代后的贴壁细胞数可达5×10^6-1×10^7数量级。骨髓基质细胞成活率约为90％，经鉴定为单核细胞，接种后1-6d细胞持续旺盛生长，至第8天细胞活性最高，随后生长活性下降。复苏冻存56d的细胞，其生长良好，增长迅速。结论：以淋巴细胞分离液梯度离心后可获得纯度较高的骨髓基质单核细胞，经体外扩增培养能够得到足够数量的种子细胞，冻存复苏后细胞活性无变化。

摘要：背景:目前在探讨骨缺损的物理和药物方法治疗的效果、检验手术方式的有效性、以及评价骨替代材料在骨缺损修复中所起的作用时,尚缺少一种客观的、标准的动物模型。目的:为骨不连的实验研究建立一种客观的动物实验模型。设计:制作兔骨不连模型的验证性实验。单位:深圳市人民医院骨科。材料:取普通级纯种新西兰大白兔20只,体质量(2.5±0.5)kg,6～8月龄,雌雄不限。方法:实验于1999-05/08在深圳市人民医院动物实验中心完成。选取纯种新西兰大白兔20只,在前臂桡骨中段截除1.5cm骨段(包括骨膜),骨断端用骨蜡封闭髓腔,10周后经大体标本、病理组织学及X射线检查确定骨不连形成情况。主要观察指标:兔前臂桡骨骨缺损模型大体观察及病理组织学和放射学检查结果。结果:纳入白兔20只(40侧桡骨)均进入结果分析。①兔骨缺损区大体观察:10周后骨缺损区可见纤维瘢痕组织填充,无骨性连接,骨蜡未吸收,骨端硬化,髓腔闭塞,两侧断端有少量骨痂形成,骨缺损范围为0.8～1.2cm。②兔骨缺损区病理组织学检查:光镜下骨断端髓腔封闭,有软骨细胞及骨细胞,细胞呈无序排列,纤维膜覆盖,缺损区为纤维瘢痕组织。③兔骨缺损区放射学检查:于10周X射线拍片见骨缺损区无骨性连接,断端硬化,髓腔封闭,两侧断端有少量骨痂形成,骨痂形成不规则。结论:实验所建立的动物模型,具有骨不连的病理改变,符合骨不连的要求,反映了骨不连的一般特征,可以认为是一种可靠而实用的实验性骨不连动物模型。

摘要：背景:红骨髓中的骨髓基质细胞是骨的非特异性生长因子,是骨形态发生蛋白的靶细胞,具有骨诱导作用和自身成骨作用;可注射性藻酸钙凝胶属于凝胶态可降解生物材料,其组织相容性好,为成骨、成软骨细胞的增殖、附着提供支架,有利于新生毛细血管的增殖。目的:制备骨形态发生蛋白、自体红骨髓及藻酸钙凝胶复合物,观察其诱导成骨活性的影响。设计:随机对照动物实验。单位:深圳市人民医院骨科,华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科。材料:实验于2002-02/2003-02在深圳市人民医院完成,选用27只纯种SD大鼠,雌雄不拘,体质量(200±20)g,购于解放军第一军医大学动物实验中心,骨形态发生蛋白购于解放军第四军医大学附属西京医院。方法:随机摸球法将大鼠分为3组:藻酸钙凝胶-骨形态发生蛋白-红骨髓组、藻酸钙凝胶-骨形态发生蛋白组及藻酸钙凝胶组,每组9只,藻酸钙凝胶-骨形态发生蛋白-红骨髓组大鼠在麻醉后,取已制备的藻酸钙凝胶-骨形态发生蛋白复合物0.4mL,于股骨大粗隆处抽取红骨髓0.1mL,加入藻酸钙凝胶-骨形态发生蛋白复合物,搅拌混合后用注射器注入股后肌肉中,藻酸钙凝胶-骨形态发生蛋白组及藻酸钙凝胶组双侧肢体股后肌群分别植入藻酸钙凝胶-骨形态发生蛋白复合物及单纯藻酸钙凝胶。①术后观察动物麻醉后苏醒、切口愈合、饮食、活动情况,同时观察植入物的大小、硬度及血管分布情况。②分别在造模后1,2,4周3个时间点进行指标检测,每个时间点3只大鼠,取出标本切片进行光镜下观察及碱性磷酸酶活性的测定。主要观察指标:①术后动物一般观察及植入物大体观察。②组织病理观察。③碱性磷酸酶活性测定结果。结果:纳入SD大鼠27只,麻醉4～6h后完全清醒,可正常进饮食;24h切口无血肿、可正常活动;72h切口无感染征象;2周后切口完全愈合、缝线脱落;全部27只大鼠切口均Ⅰ期愈合,均进入结果分析。①植入物标本大体观察:藻酸钙凝胶-骨形态发生蛋白-红骨髓、藻酸钙凝胶-骨形态发生蛋白组1周时植入物体积无减少、有血管长入;2周时质地较硬,切面呈灰白色,有骨样组织沉积;4周时有大量血管长入,有大量骨样组织沉积,质地较硬。②组织病理观察结果:藻酸钙凝胶-骨形态发生蛋白-红骨髓组1周可见大量间充质细胞聚集,骨母细胞及软骨母细胞增生活跃;2周软骨细胞趋于成熟,有软骨样基质及骨样基质;4周骨细胞多见,有编织骨形成,较其他两组成骨多。③碱性磷酸酶活性:植入后1,2,4周,藻酸钙凝胶组分别为(0.179±0.018),(0.058±0.017),(0.027±0.018)IU/g,低于藻酸钙凝胶-骨形态发生蛋白-红骨髓组[(0.922±0.226),(1.169±0.249),(0.431±0.081)IU/g,P<0.01],植入后1,4周,藻酸钙凝胶-骨形态发生蛋白组活性分别为(0.447±0.015),(0.276±0.081)IU/g,低于藻酸钙凝胶-骨形态发生蛋白-红骨骨髓组(P<0.05)。结论:藻酸钙凝胶-骨形态发生蛋白-红骨髓复合物具有稳定而持久的诱导成骨活性作用。

摘要：背景:近年来,发现一些基因的单核苷酸多态性可能与骨关节炎的易感性有关,以往研究主要集中于骨关节炎与类风湿性关节炎滑膜细胞基因表达差异,滑膜成纤维细胞与其他组织成纤维细胞基因表达差异与骨关节炎的关系有待研究。目的:观察骨关节炎滑膜成纤维细胞与皮肤成纤维细胞基因表达的差异。设计:观察对比分析。单位:深圳市人民医院。材料:骨关节炎患者(均符合1995年美国风湿病学会的骨关节炎诊断标准)滑膜及正常志愿者皮肤由深圳市人民医院骨科提供,所有提供皮肤者均对实验项目知情同意。RPMI 1640培养基、胎牛血清、TRIZOL试剂(美国Invitrogen Life Technologies公司),pGEM-T质粒系统(美国Progema公司),Display PROFILE-BASIC及Display PROFILEProbe试剂盒(美国Qbiogen公司)。方法:实验于2005-01/06在深圳市人民医院完成。选取骨关节炎患者滑膜,经原代培养获得滑膜成纤维细胞,采用正常志愿者原代培养皮肤成纤维细胞作为对照。采用限制性酶切片段差异展示技术分离骨关节炎患者滑膜成纤维细胞与皮肤成纤维细胞差异表达的基因,使用blast比对将所得序列与Genbank中所有序列进行比对分析。主要观察指标:关节炎患者滑膜成纤维细胞与皮肤成纤维细胞基因表达的差异。结果:骨关节炎患者滑膜成纤维细胞与正常志愿者皮肤成纤维细胞相比,超氧化物歧化酶、TFPI2、CXCL2、CXCL6、转化生长因子基因表达水平较高。结论:超氧化物歧化酶、TFPI2、CXCL2、CXCL6、转化生长因子基因在骨关节炎滑膜成纤维细胞表达水平高于皮肤成纤维细胞中相应基因表达水平,表明这些基因在骨关节炎疾病的发生过程中可能起到一定作用。

摘要：背景:接骨板固定常用于胫腓骨骨折的治疗,主张使用长钢板低密度螺钉固定,但目前对于胫骨中段骨折应用螺钉多少问题看法不一,且缺少生物力学依据。目的:观察胫骨中段骨折用有限接触型动力加压接骨板内固定时螺钉数量对骨折生物力学的影响。设计、时间及地点:随机分组设计,对比观察,于2008-07/09在南方医科大学人体解剖学生物力学实验室完成。材料:选取新鲜20～40岁成人尸体胫骨标本45根,长度30～38cm,平均34cm。方法:45根尸体胫骨标本随机抽签法分为3组,每组15根,分别作以下3种状态下的实验。测定完整的新鲜人胫骨在扭转、三点弯曲、压缩等状态下的应力-应变指标,确定垂直压缩应力为0～1000N,扭转角度为0°～3°,三点弯曲应力为0～400N。然后制成中段斜行无缺损骨折模型,以14孔不锈钢AO有限接触型动力加压接骨板固定,分别使用6,10,14枚螺丝钉,测定扭转、三点弯曲、压缩等应力-应变指标,进行统计学分析。主要观察指标:6枚,10枚和14枚螺丝钉固定不同压缩力垂直压缩时竖直方向应变及侧方应变值,不同扭转角度扭转时平均扭矩及不同加载应力三点弯曲压缩竖直方向应变。结果:6,10,14枚螺丝钉固定垂直压缩时竖直方向应变值两两比较差异无显著性意义(P>0.05)。6,10,14枚螺丝钉固定侧方应变值两两比较差异无显著性意义(P>0.05)。6,10,14枚螺丝钉固定扭矩两两比较差异无显著性意义(P>0.05)。6,10,14枚螺丝钉固定三点弯曲竖直方向应变值分别为0.149±0.098,0.139±0.003,0.258±0.001,6枚螺丝钉和10枚螺丝钉相比,差异无显著性意义(P>0.05),14枚螺丝钉和其他两种情况相比,差异有显著性意义(P<0.01)。结论:材质相同、厚度相同、宽度相同、长度相同的钢板,使用不同数量螺钉(6,10,14枚),抗垂直压缩稳定性、抗扭转稳定性无明显差异,抗弯曲稳定性14枚螺丝钉反而较差。

摘要：目的建立腰椎L4/5运动节段椎间盘摘除的三维有限元模型,用于进一步的生物力学研究。方法将CT扫描的腰椎图像结合人体解剖学数据通过3DSMAX建模形成正常中国男性L4/5运动节段的三维模型,用有限元分析软件SAP2000转换成三维有限元模型。去除模型中L4～5椎间盘右后侧1/4的纤维环中部全层及约1/4的髓核单元,以模拟腰椎间盘摘除手术。结果建立了L4/5运动节段椎间盘摘除的三维有限元模型。结论通过CT断层扫描、图像数字化处理及计算机辅助设计等方法,可以建立腰椎运动节段椎间盘摘除的三维有限元模型,用于脊柱生物力学的研究。

摘要：目的介绍横向复位器的设计原理及其在股骨转子下骨折闭合复位中的初步疗效。方法回顾性分析2018年3月—2019年3月深圳市人民医院骨关节外科手术治疗的20例股骨转子下骨折患者资料,男性12例,女性8例;年龄26~72岁,平均54.2岁;摔伤10例,道路交通伤7例,高处坠落伤3例。设计骨牵引复位器并申请专利(ZL201621147799.8),利用对顶牵引机制进行闭合复位且维持复位,加长防旋股骨近端髓内钉(PFNA)或髓内钉固定。随访12~14个月,平均13.2个月。记录术中复位时间、透视次数、切口长度、骨折愈合时间、Harris评分等。结果患者术中复位时间(13.5±3.10)min,复位透视次数(9.2±4.5)次,切口长度(6.1±1.0)cm,骨折愈合时间(13.9±2.8)周;患者术后12个月Harris功能评分(87.7±7.0)分,均未发生髋内翻、骨不连、内固定失效、感染等并发症。结论横向复位器在股骨转子下骨折微创治疗中具有操作简单、复位可靠等优点,值得临床推广。