摘要：应用反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),利用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳蛋白(N蛋白)ORF7基因保守序列的6个区域设计2对特异引物,经反应体系、反应条件优化及敏感性和特异性试验,建立了PRRSV RT-LAMP检测方法。研究结果表明,该检测方法不需要复杂仪器,仅用一台普通恒温水浴锅,在等温条件(63℃)保温1 h,即可完成核酸扩增反应,加入核酸染料SYBR GreenⅠ后,用肉眼即可对试验结果进行准确判定,为田间和基层部门检测猪繁殖与呼吸综合征病毒提供了一种廉价、简便、快速、敏感、特异的新方法。

摘要：建立了一种快速检测Ⅱ型猪链球菌(Streptococcus suis)的多重荧光PCR(multiplex real-time polymerase chain reaction)方法。首先,从GenBank中获得Ⅱ型猪链球菌荚膜抗原编码基因簇中的cps2I和溶菌素释放蛋白基因mrp,用Primer Express2.0设计引物和Taqman荧光探针,在ABI7500荧光PCR仪上进行荧光PCR检测。荧光曲线表明该多重荧光PCR可以特异性地检测型猪链球菌,而参考猪链球菌、大肠杆菌等细菌和空白对照均为阴性;检测方法灵敏度达10个细菌的最小检测量,整个过程仅需60min;稳定性试验表明,2次检测所得的Ct值之间无统计学差异(P>0.05)。本试验建立的多重荧光PCR检测Ⅱ型猪链球菌的方法快速、特异性强,灵敏度高,稳定性好,适合于大批量样品的检验,可广泛用于出入境检疫和动物防疫监督部门的疫情监测。

摘要：本研究利用逆转录环介导等温核酸扩增技术(RT-LAMP),以狂犬病病毒的核蛋白基因保守区段设计LAMP引物,建立了狂犬病病毒的RT-LAMP快速检测方法,并对建立的方法进行了特异性、灵敏度和稳定性试验。结果显示,该方法检测结果可直接用肉眼判断,重复性好,稳定可靠,可将狂犬病病毒与犬瘟热病毒(CDV)、犬副流感病毒(PIV)、犬腺病毒(CAV)、犬细小病毒(CPV)进行鉴别,对86份犬唾液样品和3种商品化狂犬病疫苗进行检测表明,建立的方法适用于样品中狂犬病病毒的临床检测。

摘要：为了对熊源性成分进行有效鉴定,本研究根据熊科动物线粒体DNA(mtDNA)序列,使用分子生物学软件Primer Express 3.0设计了一套特异性引物、探针,用以建立Taqman探针荧光PCR检测熊源性成分的方法。结果显示,所建立方法特异性强,15份熊属动物组织样品均出现特异性扩增曲线,20份阴性对照动物样品均未出现扩增曲线;方法灵敏度高,最低可以检测到10个拷贝数量级的重组质粒DNA,对熊胆粉稀释106倍后,仍可扩增出熊DNA;方法稳定性好,对相同的样品在不同时间进行2次重复检测,批内变异系数分别为0.88%、1.13%,批间变异系数为1.38%。结果表明,本研究建立的方法可应用于熊属动物组织及其加工品中的熊源性成分的检测。

摘要：根据禽流感病毒的基质蛋白(M)基因序列和H5亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因、神经氨酸酶(NA)基因设计并合成了三对特异性引物,用于建立H5N1禽流感病毒核酸的RT-PCR分型鉴定方法。试验证明,建立的多重PCR方法可以将H5N1与H6N2、H9N2有效区分。该方法具有较好的灵敏度和特异性,适合在基层动物防疫和监督部门进行H5N1禽流感病毒核酸的检测。

摘要：为了建立一种快速、灵敏、特异的能够同时检测猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒的多重荧光PCR方法,根据GenBank中公布的猪瘟病毒基因序列,设计一套特异性的引物和探针,对猪瘟病料提取RNA,经RT-PCR扩增后将产物回收,克隆至pMD18-T构建pMD18-T-CSFV阳性质粒;非洲猪瘟的目的片段序列采用化学合成,构建pMD18-T-ASFV阳性质粒。以两种阳性质粒为模板对建立的多重荧光PCR方法做特异性、灵敏度和重复性试验,结果表明该方法可以将猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒同口蹄疫病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪水泡病病毒、猪圆环病毒2型区分开,灵敏度可以达到10拷贝的数量级,而且方法稳定。对2份已知猪瘟阳性血清样品和120份猪内脏、猪鼻腔拭子及血清样品检测后,发现对已知阳性样品的检测结果符合预期目标,未知样品检出猪瘟病毒3份阳性,未检出非洲猪瘟病毒阳性。