摘要：目的 :克隆表达大肠杆菌脱氢奎尼酸合成酶基因aroB ,并测定其生物学活性。方法 :根据大肠杆菌中aroB基因的序列设计了一对引物 ,利用PCR技术扩增得到aroB基因 ,将其克隆入pGEM Teasy载体中 ,以双脱氧法进行测序 ,然后再克隆入高效原核表达载体pBV2 2 0 ,对该重组子的SD序列进行调节后利用温度诱导表达 ,并测酶的生物活性。结果 :构建了aroB基因的克隆和表达重组子 ,经SD序列调节后 ,aroB基因获得高效表达 ,SDS PAGE图谱显示新增 38.8× 10 3 蛋白带 ,酶活性测定结果表明脱氢奎尼酸合成酶的相对酶活性为 5 .4。结论 :实现了脱氢奎尼酸合成酶基因在大肠杆菌中的高效表达 ,为构建产脱氢奎尼酸工程菌种奠定了基础。

摘要：目的:优化L-苯丙氨酸生物合成通路上的关键酶基因pheA、aroF的蛋白表达,构建高产L-苯丙氨酸的工程菌株。方法:通过设计酶基因的间隔调控序列,分别构建重组质粒pZE12-RBS-AF和pZE12-AF,SDS-PAGE观察蛋白表达量,转入营养缺陷菌MGΔ中构建工程菌,并发酵培养。结果:工程菌MGΔpZE12-AF苯丙氨酸的产量比工程菌MGΔpZE12-RBS-AF高1倍,实现了L-苯丙氨酸生物合成关键酶基因pheA和aroF协同,匹配表达。结论:调整串联酶基因之间的间隔调控序列可实现苯丙氨酸合成酶基因的协同表达,提供了一种新的提高苯丙氨酸工程菌产量的方法。

摘要：代谢工程是利用分子生物学原理系统分析代谢途径,设计合理的遗传修饰策略从而优化细胞的生物学特性。本文对代谢工程及其在氨基酸生产上的应用进行了简单的回顾,比较了苯丙氨酸的几种合成途径,重点综述了苯丙氨酸生物合成的代谢途径、相关酶及其调控方式、代谢流和转运系统的分析研究,并对苯丙氨酸生产策略的优化及未来发展进行了展望。

摘要：目的　观察新设计的一种富含谷氨酰胺和支链氨基酸的 19种复合结晶氨基酸处方 (19AA)对创伤大鼠的营养支持效果。方法　 2 0只Wistar雄性大鼠 ,随机分成实验组 (19AA组 )和对照组 (国产 17种复合结晶氨基酸 ,17AA组 )。大鼠行创伤手术后 ,分别饲喂以 17AA和 19AA为唯一氮源的合成饲料 ,自由摄食、饮水 ,每日称取饲料、称重 ,术前及术后 3、 7和 14d采血 ,用于测定血浆前白蛋白、白蛋白、总蛋白、纤维结合蛋白和血浆氨基酸水平 :收集尿和粪 ,用于氮平衡分析和 3一甲基组氨酸测定。结果　19AA组在体重恢复、血浆蛋白恢复及血浆氨基酸图谱的纠正方面均快于 17AA组。结论　这种新型的 19种复方氨基酸配方对创伤大鼠的营养支持效果优于 17AA。

摘要：目的:克隆表达大肠杆菌莽草酸脱氢酶基因aroE,并测定其生物学活性。方法:根据大肠杆菌中aroE基因的序列设计了一对引物,利用PCR技术扩增得到aroE基因,将其克隆入高效原核表达载体pBV220,以双脱氧法进行测序,然后对该重组子利用温度诱导表达,并测酶的生物活性。结果:构建了aroE基因的克隆和表达重组子,aroE基因获得高效表达,SDS-PAGE图谱显示新增30×103蛋白带,酶活性测定结果表明奎尼酸脱氢酶的相对酶活性是5.6倍。结论:实现了莽草酸脱氢酶基因在大肠杆菌中的高效表达,证明了其具有奎尼酸脱氢酶活性,为构建产奎尼酸工程菌种奠定了基础。

摘要：肠内和肠外营养支持在临床疾病治疗中发挥着重要作用，营养支持过程中的许多代谢问题以及临床研究的局限性，促进了动物尤其小动物静脉营养实验的研究与发展。我们参考国外有关文献［1］，自行改进制作了无拘束动物静脉输液装置，并建立了创伤大鼠中心静脉输注模型。 一、材料与方法 1.输液装置的制作:参照Gibbs［1］的设计，自行改进制作了图1所示的针套式旋转器输液装置。装置的上端是一个注射器针管，上面有一硬质接管用来与输液管道连接，内有2个注射针头，针头之间用一“O”形环密闭，针杆上边接一弹簧螺旋管，保护输液管道不被动物噬咬，螺旋管下端有一金属被扣，用来将螺旋管固定在动物背部。输液泵购自美国Coler-parmer仪器公司。