摘要：建立了一种基于环介导等温扩增技术(Loop-mediated Isothermal Amplification,LAMP)和核酸分子"光开关"[Ru(phen)_(2)dppz]^(2+)相结合的新型冠状病毒高灵敏可视化检测方法。分别采用保温杯代替实验室恒温装置,采用蓝光手电代替蓝光透射仪,实现了新冠病毒的现场快速可视化LAMP检测。针对新型冠状病毒N基因设计特异性序列引物,采用[Ru(phen)_(2)dppz]^(2+)分子光开关的特性检测LAMP扩增产物,结果可以借助蓝光手电直接通过肉眼观察是否出现红色荧光进行判定。该方法可检测到单个拷贝数的新型冠状病毒基因片段,并具有高度特异性,检验快速,整个过程仅需40min即可目视观察结果。对新冠病毒假病毒人工污染的模拟冷链食品进行检测,结果与目前新型冠状病毒检测金标准实时荧光定量PCR法吻合度为100%。该方法仅需保温杯和蓝光手电,可以作为实时荧光PCR方法的补充,为食品新冠病毒的现场筛查提供快速高效的技术支持。

摘要：核酸扩增反应能够在短时间内将特定DNA模板的数量增加106~109倍,显著提高微量核酸检测的灵敏度,但同时扩增产物的遗漏极易造成交叉污染,影响后续检测。扩增反应通过添加荧光染料实现的实时闭管检测,不仅可以避免反应结束后开管操作所导致的交叉污染,还可以通过反应动力学对样品中模板的起始拷贝数定量,以及通过熔解曲线分析鉴别多种靶标来源、进行基因突变扫描和基因分型检测。目前常用的商业化实时检测荧光染料,如SYBR Green I、Eva Green等,其精确结构信息尚未披露,因此只能通过实验“试错法”选取合适染料,无法从根本上获知染料结构和分析性能之间的关系。本文将通过对目前常用的核酸实时检测荧光染料性质和应用进行总结,为其优化选择、设计和开发提供参考依据。

摘要：选取牛、羊线粒体12S rRNA基因的特异性引物,以新鲜牛、羊乳样品提取模板DNA,建立了基于DNA结合染料(SYBR Green I)的实时荧光定量PCR方法,用于羊乳制品中牛乳成分的掺假鉴别检测。结果表明,该方法最低可检出新鲜羊奶中掺入2.5%的牛乳成分,并应用于11份市售羊乳制品样本中的牛、羊源性成分的鉴别。基于DNA结合染料的定量PCR检测无需电泳分离和设计标记DNA探针,具有快速、灵敏、低成本和高通量等优点,可以作为羊乳及其深加工制品中牛乳源性成分掺入检测的有效手段之一。

摘要：为了提高检测效率,节省时间、试剂和样本,建立了基于高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)的双重环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术用于羊乳中牛乳成分的检测。通过引物设计优化,牛引物目标产物的T m值在80℃,羊引物目标产物的T m值在83℃,由于在传统熔解曲线中峰型有交叉重叠,同时检测存在干扰,因此使用HRM技术,实现了2种不同动物源性成分的有效区分。该方法特异性好,不需要针对牛、羊源性成分单独进行检测,当体系中存在其中一种或两种都存在时都可将其快速检出,且对其他物种没有交叉反应及假阳性现象的发生,成功应用于市售羊乳及其制品的检测。

摘要：根据牛、羊的线粒体12SrRNA基因为靶基因设计合成两对特异性引物,建立了羊乳中掺入牛乳的双重PCR检测方法,对鲜乳中快速DNA提取进行了快速法和磁珠法的比较研究.结果显示,利用快速法提取出的DNA纯度欠佳,羊乳中能检测出牛乳10%的掺入比例,而利用磁珠法提取的DNA纯度高、重复性好,在羊乳及其制品中掺入牛乳检出值能达到1%,将该检测方法应用于巴氏杀菌乳和不同品牌市售羊奶粉的掺假牛乳的检验验证.以磁珠法来提取DNA,双重PCR检测方法可以作为羊乳及其制品中掺入牛乳源性成分的有效手段之一,为羊乳行业的掺假行为提供一定技术依据.

摘要：环介导等温扩增(LAMP)技术能够快速检测食品中的动物源性成分,但常用的有机检测染料稳定性差、Stoke′s位移小等导致荧光颜色区分不够明显.基于此,根据线粒体保守序列设计牛、羊特异性引物,同时采用核酸分子“光开光”钌(II)配合物[Ru(bpy)2(dppz)]2+作为荧光染料,建立了一种简便、快速、直观地检测羊奶制品中掺入牛源性奶成分的可视化LAMP方法.结果显示,该方法特异性好,对其他物种没有交叉反应及假阳性现象的发生,对牛、羊的检测灵敏度可达0.007 pg/μL和0.7 pg/μL,并能检测出羊乳中掺假0.1%的牛乳.因此,该方法可直接通过荧光目视比色判定检测结果,具有快速、直观、低成本等优点,为羊奶真实性现场快速检测提供技术支持.