摘要：本研究旨在筛选抑制B组柯萨奇病毒(coxsackievirus B,CVB)3D聚合酶表达的短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)并构建其慢病毒表达载体,以抑制CVB的3D聚合酶表达。设计并合成3对针对3D基因的RNA干扰序列及相应的对照组序列,通过定量反转录-聚合酶链反应(quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-qPCR)和蛋白免疫印迹法筛选出干扰效率最高的一对,合成shRNA序列。退火后,应用基因重组技术构建pLVTHM-3DshRNA重组质粒,经酶切鉴定及DNA测序后,将重组正确的pLVTHM-3DshRNA与psPAX2、pMD2.G共转染293T细胞,包装慢病毒并鉴定其对CVB3 3D基因表达的干扰效果。测序结果显示,成功构建了pLVTHM-3DshRNA重组慢病毒载体,并收获了包装后的慢病毒,病毒滴度为5×10^(7 )TU。感染HeLa细胞和BALB/c小鼠后,3D聚合酶表达量下降。本研究成功构建了慢病毒Lenti-sh3D,其能有效下调CVB 3D聚合酶的表达,为进一步抗CVB致病机制的研究奠定了基础。

摘要：医学微生物学是一门连接基础医学和临床医学的重要基础课程,具有知识点多、易混淆且难记忆等特点。将思维导图引入医学微生物学教学,不仅丰富了传统教学方法,激发了学生的学习兴趣,还有助于学生对知识整体结构和关键点的掌握,有效提升了教学质量。