摘要：背景:青藤碱是从抗风湿中药青风藤中分离提取的单体生物碱,具有抗炎、镇痛、免疫抑制等药理作用,该药用于治疗类风湿性关节炎等风湿性疾病具有较明确的疗效,在临床上得到了广泛的应用。树突状细胞是目前所知的机体内功能最强的抗原提呈细胞。目的:观察不同剂量青藤碱对树突状细胞CD80和CD86表达及胞外白细胞介素12分泌的影响。设计:重复测量实验。单位:广东医学院药理教研室。材料:实验于2004-09/2005-05在解放军第三军医大学全军免疫学研究所完成。健康志愿者外周血由西南医院血库提供。青藤碱由湖南正清药业有限公司提供。RPMI1640培养基购于Hyclone公司,FITC标记的单克隆抗体CD80、CD86、鼠免疫球蛋白亚型IgG1均购于eBioscience公司,重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子,重组人白细胞介素4,肿瘤坏死因子α购于PE公司。人白细胞介素12ELISA试剂盒购于法国Diaclone公司。方法:取健康志愿者外周血稀释,培养,按重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子1×106U/L、重组人白细胞介素45×105U/L终浓度加入细胞因子,培养7d后可获得树突状细胞。①将常规培养7d后的树突状细胞调整细胞浓度为2×108L-1,加入6孔培养板,分别加入青藤碱使其终浓度为3,10,30mg/L以及肿瘤坏死因子α使其终浓度为10μg/L,同时设对照组,于第9天分别收集悬浮细胞,每管取2×105细胞,用PBS洗涤2次,加入20μLFITC标记的CD80或CD86,对照管则加入鼠免疫球蛋白亚型IgG1,4℃避光孵育30min,充分洗涤后,10g/L多聚甲醛固定,将细胞悬液在流式细胞仪上进行分析。②将常规培养7d后的树突状细胞调整细胞浓度为2×108L-1,加入6孔培养版,分别加入青藤碱使其终浓度为3,10,30mg/L以及肿瘤坏死因子α使其终浓度为10μg/L,同时设对照组,继续培养48h后,收集上清进行白细胞介素12测定。白细胞介素12的检测采用夹心ELISA法检测胞外的白细胞介素12分泌量,按试剂盒说明操作。主要观察指标:①不同剂量青藤碱对树突状细胞表面CD80及CD86表达的影响。②不同剂量青藤碱对树突状细胞分泌白细胞介素12的影响。结果:①树突状细胞表面CD80及CD86表达:不同剂量青藤碱组与对照组树突状细胞表面CD80分子阳性表达率及平均荧光强度差异无统计学意义(P>0.05),各组细胞表面CD86分子阳性表达率及平均荧光强度差异亦无统计学意义(P>0.05)。②各组树突状细胞分泌白细胞介素12水平检测结果:由ELISA测量值可见,青藤碱小、中、大剂量组树突状细胞白细胞介素12水平分别为(863.1±33.7),(668.8±31.9),(512.6±29.6)ng/L,高于对照组[(922.2±36.6),P<0.05-0.01],随青藤碱剂量增大,抑制树突状细胞分泌白细胞介素12水平呈依赖性减少。结论:青藤碱可剂量依赖性地抑制树突状细胞分泌白细胞介素12,而对树突状细胞表面CD80和CD83表达无明显影响;青藤碱的抗类风湿作用可能与其抑制树突状细胞分泌白细胞介素12有关。

摘要：研究性教学是针对传统的被动接受式教学模式弊端而提出的一种新的教学模式。文章从教学内容的设计、课堂教学的形式和教学评价等方面,对"药事管理学"的研究性教学进行探索。通过教学改革,激发学生学习的主观能动性与积极性,提高学生分析问题和解决问题的能力,以利于学生创新能力的培养。

摘要：糖基化广泛存在于生物体中,具有非常重要的作用,而糖基转移酶则是催化糖基化反应的关键酶。本研究根据转录组数据库,设计引物从金银花(Lonicera japonica Thunb.)中克隆得到一个糖基转移酶编码基因LjUGT71E1,序列分析表明该基因的CDS为1 503 bp,理论可编码氨基酸数目为501,等电点(p I)预测为5.09,理论分子量为55 579.71 Da。多重序列比对表明LjUGT71E1与其它植物UGT71家族成员在序列上保守性很高,并且其C端具有催化植物次生代谢产物糖基化的糖基转移酶所具有的保守的PSPG-box基序。系统发生分析表明LjUGT71E1与人参(Panax ginseng)和甜叶菊(Stevia rebaudiana)的UGT71E亚家族成员聚为一支。荧光定量PCR分析表明,该基因在金银花的五个花期均有表达,在幼蕾时期相对表达量达到峰值。进一步构建了LjUGT71E1基因的原核表达载体并且在大肠杆菌中诱导表达得到重组蛋白,为后续的功能研究提供了基础。

摘要：背景:研究表明骨质疏松症可能是间充质干细胞分化失衡后过多地向脂肪细胞分化所致。因此,探讨骨髓间充质干细胞成脂分化的影响因素对骨质疏松症防治具有重要意义。目的:分析骨髓间充质干细胞在体外定向分化为脂肪细胞的适宜诱导条件。设计、时间及地点:以细胞为对象,重复观察测量实验,于2007-10/2008-07在广东医学院药理教研室完成。材料:1月龄SD雄性大鼠由广东医学院实验动物中心提供。方法:无菌条件下分离大鼠股骨,密度梯度离心法与贴壁培养法相结合分离、纯化骨髓间充质干细胞并在体外进行培养。第3代骨髓间充质干细胞完全汇合后,利用内含0.1mmoL/L3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、0.1mmoL/L吲哚美辛、1μmoL/L地塞米松、不同浓度胰岛素及胎牛血清的DMEM定向诱导骨髓间充质干细胞分化为脂肪细胞。主要观察指标:①倒置显微镜下观察骨髓间充质干细胞形态特征。②油红O染色检测骨髓间充质干细胞成脂肪分化情况。结果:①倒置显微镜下观察,传3代后可获得均一性较高的骨髓间充质干细胞。②体积分数为0.05和0.1胎牛血清均能获得较好的成脂分化效果,胎牛血清体积分数增至0.2反而抑制骨髓间充质干细胞成脂分化(P0.05)④低糖(含葡萄糖1g/L)和高糖(含葡萄糖4.5g/L)DMEM对骨髓间充质干细胞的成脂分化无影响(P>0.05)。结论:骨髓间充质干细胞经内含0.1mmoL/L3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、10mg/L胰岛素、0.1mmoL/L吲哚美辛、1μmoL/L地塞米松、体积分数为0.1胎牛血清的DMEM分化诱导液定向诱导可获得较好的成脂分化效果。

摘要：为提高白芨组培苗的驯化成活率及促进其生长,设计L_9(3~3)正交试验,选用苔藓、椰糠和珍珠岩3种不同基质,设置3个水平不完全区组试验,检测各处理移栽存活率、叶片数、叶片长、叶片宽、根数和根长,探讨不同基质组合对白芨组培苗炼苗的影响。结果显示,质量比1∶6∶12的苔藓、椰糠、珍珠岩组合最有利于白芨组培苗驯化,成活率达60.49%;质量比1∶9∶4的组合最有利于白芨组培苗生物量积累,1月龄苗株质量达到1.46 g;质量比1∶6∶12的组合最有利于叶片数增多和叶片的伸长生长,叶片数达到3.3张,株高、叶片长分别为0.93、7.81 cm;质量比1∶3∶8的组合最有利于叶片宽度生长,达到0.91 cm;质量比1∶18∶24的组合最有利于根数增多,平均根数达10.3条;质量比1∶9∶4的组合最有利于根系的伸长生长,总根长达56.87 cm,最长根长达10.04 cm,平均根长达5.79 cm。正交试验直观分析结果表明,3种栽培基质对白芨组培苗炼苗影响的大小顺序为苔藓>椰糠>珍珠岩,最有利于移栽存活和地上部分生长的基质组合均为质量比1∶6∶12的苔藓、椰糠、珍珠岩。方差分析结果表明,苔藓对移栽成活率、地上部分影响显著,而苔藓、椰糠、珍珠岩3种栽培基质对生物量生长、地下部分生长影响均不显著。

摘要：目的　以人乳头瘤病毒早期基因表达产物E7作为靶标 ,设计和合成宫颈癌治疗性疫苗并探讨其生物学效应。方法　以芴甲氧羰基固相法合成多肽 ,用高效液相色谱分析多肽的纯度 ,对所合成的多肽采用质谱进行定性鉴定 ,以HLA A2 .1 Kb 转基因鼠为实验对象 ,对其诱导抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞活性进行研究。结果　合成的多肽经纯化后纯度都达到 80 %以上 ,经质谱分析 ,各肽的相对分子质量测定值与理论值相符 ,在效靶比为 10 0∶1时 ,靶细胞特异性溶破率为 6 5 .0 %。结论　所设计。

摘要：目的:探讨基于人乳头瘤病毒抗原优势表位的治疗性多肽抗原组分、结构与诱导免疫应答之间的关系。方法:以芴甲氧羰基固相法合成多肽,用高效液相色谱分析多肽的纯度,对所合成的多肽采用质谱进行定性鉴定,用标准51Cr释放试验检测特异性细胞毒性T淋巴细胞活性。结果:合成的多肽经纯化后纯度都达到80%以上,经质谱分析,各肽的分子量测定值与理论值相符,所设计的治疗性多肽在体内外均诱导出较强的表位特异性细胞毒性T淋巴细胞活性。结论:在治疗性表位多肽设计中,将辅助性T细胞表位及脂类分子构建于分子内部可提高细胞毒性T淋巴细胞表位肽的免疫原性。

摘要：目的:设计并合成宫颈癌治疗性多肽疫苗,并对其免疫学效应进行研究。方法:以芴甲氧羰基固相法合成多肽,用高效液相色谱分析多肽的纯度,对所合成的多肽采用质谱进行鉴定,用标准51Cr释放试验检测各肽在HLA-A2转基因鼠中诱导的表位特异性细胞毒性T淋巴细胞活性。结果:合成的多肽经纯化后纯度分别为86.5%、81.8%和98.5%,质谱分析各肽的相对分子质量分别为3121、2580和815,与理论值相符。其在HLA-A2转基因鼠中可诱导出强的表位特异性细胞毒性T淋巴细胞活性。结论:合成的多肽为目标肽,将辅助性T细胞表位及脂类分子构建于分子内部可提高细胞毒性T淋巴细胞表位肽的免疫原性。

摘要：创新是一个国家发展的核心,产品技术创新设计能力在一定程度上决定企业乃至国家的竞争力。该文以金源泉公司富氢杯产品为例,基于TRIZ方法,利用空间分离、多用性发明原理等,探讨产品设计,并形成系列新产品技术方案。