摘要：目的:用重叠延伸PCR(overlap extension PCR)法获得人工优化的干扰素-重组复合干扰素(consensus interferon,cIFN)基因,用原核表达系统对其进行表达,鉴定表达的cIFN活性.方法:根据大肠杆菌的偏爱密码子,人工设计cIFN的高表达基因,用overlap PCR法合成cIFN全基因,用基因重组技术构建其原核表达载体pRA-cIFN,在大肠杆菌BL21中进行高效表达,用SDS-PAGE和Western blotting鉴定cIFN表达,用GuHCl阶段透析法进行蛋白变性、复性,用TALON(His)6亲和层析柱进行纯化,用ELISA、MTS比色定量法及血凝抑制试验检测cIFN的免疫活性和生物活性.结果:成功合成了cIFN全基因,其DNA长度与理论长度534 bp相符;用基因重组技术成功构建了cIFN原核表达载体pRA-cIFN,并用大肠杆茵BL21进行了高效表达。SDS-PAGE和Western blotting鉴定结果显示,表达蛋白主要以包涵体形式存在,其分子质量符合理论值23-3 kDa;用GuHCl阶段透析法成功进行包涵体蛋白的复性,亲和层析法纯化后cIFN的ELISA、MTS比色定量法及血凝抑制试验结果显示。表达蛋白具有明显的cIFN免疫学活性、剂量依赖性PLC/PRF/5细胞增殖抑制作用和HBsAg分泌抑制作用.结论:重叠延伸PCR法是获得重组复合基因的有效简便的方法,我们通过重叠延伸PCR法获得并表达的cIFN具有明显的抗病毒、抗细胞增殖活性.

摘要：目的:建立一种以丙型肝炎病毒(HCV)干扰素敏感决定区(ISDR)特异性引物为基础的聚合酶链反应(PCR)方法,对HCVISDR进行序列测定.方法:根据GenBank中6株HCV全序列核苷酸序列,设计共同的外引物及三组ISDR型特异性内引物.建立了HCVISDRPCR检测方法,对27例HCV基因型1b的慢性丙型肝炎患者血清HCVRNA进行测定,并对PCR阳性标本的产物进行多位点分析.结果:A组PCR结果阳性率为37%(10/27),A-B组为30%(8/27),A-C组为4%(1/27),A-B-C组为22%(6/27),三组均阳性者有5例为使用IFN治疗6-12mo后定性PCR检测HCVRNA转阴,停药3mo后PCR检测HCVRNA结果仍为阴性.结论:以ISDR特异性引物为基础的PCR法可靠、简便,可用于丙型病毒性肝炎患者对HCV进行敏感决定区的测定,用于以NS5A-ISDR突变数量来预测HCV基因型1b感染的患者对IFN的持续应答.

摘要：目的 探讨HCV基因型对慢性丙型肝炎的干扰素(IFN)治疗效果的影响。 方法 采用随机、开放和对照的多中心临床试验设计。208例受试者按1∶1随机分到聚乙二醇干扰素α-2a(Peg-IFN)组和IFN-α-2a组。在治疗之前,用Simmonds基因分型法酶切分型,在治疗24周结束和完成24周的随访后检测患者的ALT和HCV RNA,以HCV RNA的阴转率作为主要评价指标,经ITT人群的统计学分析。 结果 202例患者确定了HCV基因型,基因1型158例(78.2％),非基因1型44例(21.8％)。治疗结束病毒应答率(ETVR)和持续病毒应答率(SVR)基因1型患者分别为53.8％和25.3％,非基因1型患者分别为61.4％和43.2％,SVR两组患者差异有显著性,x2=5.313,P=0.021。Peg-IFN组基因1型和非1型患者的ETVR分别为76.8％和81.0％,SVR分别为35.4％和66.7％,SVR两组患者差异有显著性,x2=6.735,P=0.01。病毒复发率基因1型和非基因1型患者分别为55.6％和23.5％,差异有显著性,x2=5.496,P=0.02。IFN-α-2a组,ETVR和SVR基因1型患者分别为29.0％和14.5％,非基因1型患者分别43.5％和21.7％,差异无显著性。病毒复发率基因1型患者为72.7％,非基因1型患者为50.0%,差异无显著性。 结论 IFN对基因1型丙型肝炎患者的疗效低于非基因1型,HCV基因型主要影响IFN对慢性丙型肝炎的持续应答,也?

摘要：目的　以干扰素α 2a(IFNα 2a ,罗荛愫 ,罗氏 )为对照 ,评估聚乙二醇干扰素α 2a(FEG IFNα 2a ,派罗欣 ,罗氏 )治疗中国慢性丙型肝炎的效果及其安全性和耐受性。方法　采用随机、开放和对照的多中心临床试验设计 ,将 2 0 8例慢性丙型肝炎患者随机分为PEG IFNα 2a组 (10 6例 )和IFNα 2a组 (10 2例 ) ,两组治疗前HCVRNA、基因型等临床资料具有可比性 ,以病毒学应答和生化应答作为疗效的主要评价指标。同时观察患者药物治疗后的不良反应。结果　PEG IFNα 2a组持续性病毒应答率 (SVR)显著高于IFNα 2a组 (分别是 4 1.5 1%和 16 .6 7% ,P <0 .0 0 0 1)。PEG IFNα 2a治疗HCV基因 1型和非基因 1型的SVR显著高于IFNα 2a组 (P =0 .0 0 3) ,PEG IFNα 2a治疗高病毒载量慢性丙型肝炎的SVR明显高于IFNα 2a组 (P =0 .0 0 0 3) ,但是低病毒载量的SVR两组之间差异无显著性 (P =0 .0 5 9)。PEG IFNα 2a与IFNα 2a有相似的不良反应 ,不良反应间差异无显著性 ,两组患者均无发生不良事件。结论　PEG IFNα 2a对慢性丙型肝炎患者的疗效优于传统干扰素IFNα 2a ,在中国慢性丙型肝炎人群中具有较好的安全性和耐受性。

摘要：目的评价阿德福韦酯(ADV)片10 mg/d 治疗 HBeAg 阳性的中国慢性乙型病毒性肝炎患者52周的疗效和安全性。方法采用多中心、随机、双盲、安慰剂平行对照的研究设计。第一阶段480例患者按3:1的比例随机进入 ADV 组(360例)或安慰剂组(120例)治疗12周;第二阶段所有患者均接受开放的 ADV 治疗28周;第三阶段则原接受 ADV 治疗的患者重新按2:1的比例随机接受 ADV 治疗(AAA 组)或安慰剂治疗(AAP 组);而第一阶段服用安慰剂的患者(PAA 组)将继续接受 ADV 治疗。根据不同的组别,患者分别口服 ADV 10 mg 或安慰剂1片,1日1次。主要疗效评估指标为血清 HBV DNA 的变化情况。次要疗效评估指标为丙氨酸转氨酶(ALT)的复常率与HBeAg 转阴率、HBeAg 的血清转换率。结果 12周时,AAA 组和 AAP 组 HBV DNA 中位数水平较基线分别降低3.4 lg 拷贝/ml 和3.3 lg 拷贝/ml;40周时,三组血清 HBV DNA 中位数水平降低程度相似,较基线降低了4.0～4.6 lg 拷贝/ml;52周时,PAA 组和 AAA 组 HBV DNA 中位数水平较基线分别降低5.0 lg 拷贝/ml 和4.5 lg 拷贝/ml,而 AAP 组 HBV DNA 中位数水平则恢复到接近基线水平;PAA 组和 AAA 组患者分别有30.3%和28.4%的患者 HBV DNA 转阴,而 AAP 组 HBV DNA转阴率从40周的19.3%(23/119)降低到0.8%(1/119);PAA 组和 AAA 组 ALT 复常率分别为69.2%(74/107)和78.6%(176/224),而 AAP 组的 ALT 复常率由40周时的74.3%(81/109)下降为52周的21.1%(23/109);PAA 组和 AAA 组 HBeAg 转阴率分别为20%(24/119)和13%(30/237),血清转换率分别为17%(20/116)和8%(19/232).而 AAP 组的 HBeAg 转阴率和血清转换率分别从40周的14%(16/114)和11%(12/112)降低到52周时的9%(10/114)和4%(5/112)。45例血清 HBV DNA 水平较治疗最低水平增高≥1 lg 的患者中未发现与 ADV 耐药相关的基因突变。安全性方面,各组至少发生1个与药物相关不良事件的发生率为5%～11%,大多为轻、中度。研究期间各治疗组血清肌酐及血磷值平均水平同基线相比无变化。结论阿德福韦酯片10 mg/d 剂量服用52周,可以安全、有效地治疗中国 HBeAg 阳性的慢性乙型肝炎患者.未发现与 ADV 耐药相关的病毒基因突变。

摘要：目的：以环内沙星注射剂为对照，采用随机对照、多中心、平行开放的试验设计，评价左氧氟沙星治疗敏感菌引起的临床感染的有效性和安全性。方法：左氧氟沙星注射剂用法用量为２００－３００ｍｇ，ｂｉｄ；环丙沙星注射剂的用法用量为２００－４００ｍｇ，ｂｉｄ。两组的疗程均为７－１４ｄ。左氧氟沙星组临床可评价病例为１０８例，细菌学疗效评价例数为９１例，药物不良反应评价例数为１０９例；环丙沙星组分别为１１０例，８８例和１１２例。结果：试验药组和对照组的临床有效率分别为９９．１％，９６．４％；细菌清除率分别为９２．４％，９３．３％；药物不良反应发生率分别为８．３％，８．９％。结论：左氧氟沙星注射剂是治疗临床感染的安全有效的药物。

摘要：目的观察替比夫定、拉米夫定治疗24周时对HBV的抑制程度,与治疗1年疗效的相关性,探讨临床实用的疗效预测指标。方法Ⅲ期临床研究,采用随机、对照、双盲、双模拟、多中心设计。共入组慢性乙型肝炎患者332例,其中替比夫定组167例,拉米夫定组165例。根据治疗24周时血清HBV DNA的水平,将患者分为4组：PCR低于检测下限（QL）组（〈300拷贝／ml）、QL-〈10^3拷贝／ml组、10^3-〈10^4拷贝／ml组和≥104拷贝／ml组。结果治疗52周时,替比夫定组血清HBV DNA自基线下降6．2log10,拉米夫定组下降5．4log10,t=3．6,P〈0．01,差异有统计学意义。HBV DNA低于检测下限的比例分别为69．6％和43．4％,χ^2=6．5,P〈0．01,差异有统计学意义。不论替比夫定组还是拉米夫定组治疗24周时HBV DNA水平越低,在52周HBV DNA达到PCR检测不到的水平、HBeAg血清转换和ALT复常的比率越高,48周病毒耐药的发生率越低。24周时替比夫定组HBV DNA低于检测下限的患者在52周时达到HBeAg血清转换的比率为43．3％,≥300拷贝／ml患者为8．8％,χ^2=21．6,P〈0．01,差异有统计学意义。结论替比夫定或拉米夫定治疗24周时,PCR检测不到HBV DNA,提示在52周可达到较佳疗效;24周时病毒水平下降不理想提示发生耐药的可能性增加。24周对HBV DNA的抑制程度可作为1年疗效的预测指标。