摘要：目的构建针对人SET-和MYND-结构域含有蛋白3(SMYD3)基因的短发夹状RNA (shRNA)表达载体pGenesil-1-s,观察其对人肝癌细胞株HepG2细胞SMYD3基因表达的特异性抑制效应。方法设计合成针对SMYD3 mRNA编码序列267～288、302～323靶位点之间的核苷酸片断,并定向克隆到仅表达EGFP的空载体pGenesil-1的U6启动子下,构建重组质粒pGenesil-1-s1、pGenesil-1-s2；不针对任何序列的重组质粒pGenesil-1-hk作为对照。通过脂质体介导转染人肝癌细胞株HepG2,应用逆转录聚合酶链反应,western blot蛋白免疫印迹法分别从mRNA、蛋白水平检测阻抑效应。结果酶切鉴定和测序结果证实了pGenesil-1-s1、pGenesil-1-s2、pGenesil-1-hk的成功构建,转染HepG2细胞后,pGenesil-1- s1、pGenesil-1-s2组SMYD3 mRNA和蛋白表达均明显下调,与pGenesil-1-hk组及pGenesil-1对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01)。结论构建的重组质粒pGenesil-1-s1、pGenesil-1-s2能特异性抑制SMYD3 在HepG2细胞中的表达。

摘要：目的探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV-TK）基因导人T细胞克隆治疗溃疡性结肠炎（UC）大鼠的作用。方法将HSV-TK基因导人T细胞克隆回输至27只UC大鼠，观察刺激指数（SI）、CD4^＋、CD8^＋及白细胞介素（IL）-13和IL-4水平的变化，并比较治疗前后结肠病变的情况。结果UC大鼠结肠壁病变于tk^＋细胞克隆回输治疗2-3d出现炎性反应吸收改变，7-10d后结肠炎性反应基本消失；回输前SI值为7．39±1．24，回输后为2．67±0．87（P〈0．05），CD4^＋、CD8^＋水平、IL-13和IL-4水平明显下降，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论T细胞克隆疫苗诱导和tk基因导入后杀伤效应的双重作用导致结肠自身抗原特异性免疫耐受的最终形成，HSV-TK自杀基因导入T细胞克隆回输方案是UC基因治疗研究和靶点设计的有效手段。