摘要：伤寒沙门菌是一种具有鞭毛的革兰阴性人类肠道致病菌,也是一种重要的原核生物研究用模式菌.基因组芯片能够系统、全面且高效地观察生物的基因表达及进行基因组结构比较.利用伤寒沙门菌现有的全基因组序列,以Ty2菌株的基因组为基准,选取CT18菌株和z66阳性菌株的特异性蛋白编码基因,设计特异性引物,经PCR有效扩增出4201个基因,产物纯化后点样于多聚赖氨酸玻片制备伤寒沙门菌基因组DNA芯片,并验证了芯片样点位次与效果.通过对基因表达谱分析的各种条件进行优化,建立相应的表达谱分析方法,并用于比较伤寒沙门菌野生株在高渗、低渗条件下的基因表达差异,结果与以前的报道基本一致.结果表明,成功建立了伤寒沙门菌基因组DNA芯片及表达谱分析方法,可为有关伤寒沙门菌基因表达调控及致病性机理、进化和基因多样性等方面的深入研究提供有效的技术支持.

摘要：目的:构建荧光实时定量RT-PCR测定伤寒杆菌鞭毛抗原z66和d/j编码基因mRNA的方法。方法:根据伤寒杆菌鞭毛抗原z66和d/j编码基因序列,设计引物扩增其读码框架内片段,克隆进pGEM-TEasy质粒。质粒经PCR鉴定后,纯化并定量,作为荧光实时定量PCR的标准品,并制作标准曲线。利用不同渗透压下的鞭毛素基因表达差异,比较三种随机引物(6、8、10核苷酸)与特异性引物的逆转录效果,以确定一种最佳的随机引物用于多基因表达观察。结果:标准曲线有较好的线性(r=0.999),cDNA和标准品的PCR产物溶解曲线峰值一致。用8核苷酸随机引物进行逆转录的敏感度高于6、10核苷酸随机引物,低于特异性引物,但用其观测z66抗原基因和d/j抗原基因在高、低渗时表达变化趋势与用特异性引物测得结果一致。结论:成功构建用8核苷酸随机引物进行逆转录同时测定伤寒杆菌鞭毛抗原z66和d/j基因表达的荧光实时定量RT-PCR方法。

摘要：目的:为研究伤寒沙门菌z66鞭毛抗原编码基因fljB的表达调节机制,建立该fljB基因的β-半乳糖苷酶基因(lacZ)插入变异株。方法:采用自杀质粒介导的同源重组方法进行制备。设计加接KpnⅠ和SalⅠ的特异性引物,用PCR扩增获得fljB基因的上、下游同源性DNA片段,并与用KpnⅠ和SalⅠ酶切pSV-β-半乳糖苷酶载体(pSV-β-galactosidase vector)的片段定向连接,将连接片段克隆至自杀质粒pGMB151,再通过电击法将重组质粒转入伤寒沙门菌,在含X-Gal的蔗糖平板上筛选获得同源重组的变异株。结果:经筛选获得阳性克隆,经PCR及序列分析证实,fljB基因中的763 bp被3550 bp的lacZ片段替代。结论:成功构建伤寒沙门菌flj∶∶lacZ突变株,为进一步研究fljB基因表达调节机制奠定了基础。

摘要：目的:为探讨z66鞭毛抗原阳性伤寒沙门菌的fljA样基因的功能,制备沙门菌fljA样基因缺陷变异株。方法:根据伤寒沙门菌fljA样基因序列,设计PCR特异性引物并在5'末端加接酶BglII位点,扩增fljA样基因上、下游片段,用BglII消化后,定向连接成fljA样基因的缺损性同源性核苷酸片段,先克隆至pGEM T质粒,再经BamHI酶切后导入自杀质粒pGMB151,电转化入伤寒沙门菌(GIFU10007),进行同源重组。用PCR观察重组现象,将完全重组的菌株作为fljA样基因的缺陷变异株,并通过相应的核苷酸序列分析加以确定。结果:PCR及序列分析证实,缺陷变异株的fljA样基因缺失231个碱基。结论:成功构建伤寒沙门菌fljA样基因缺陷变异株,为进一步研究其在伤寒沙门菌鞭毛抗原表达的调控作用奠定了基础。

摘要：目的:进一步明确二相伤寒沙门菌鞭毛抗原表达调节机制,系统分析伤寒沙门菌fljA样基因功能,构建含fljA样基因的表达载体并验证其表达。方法:根据fljA样基因两端序列设计引物,以z66抗原阳性伤寒沙门菌G IFU10007基因组为模板,通过PCR获得该基因,与表达载体pET22b连接后,重组体转化至大肠杆菌JM109中诱导培养,并通过RT-PCR观察fljA样基因表达情况。结果:基因克隆和序列分析结果显示伤寒沙门菌fljA样基因被成功导入载体pET22b,RT-PCR结果提示大肠杆菌JM109可利用此重组载体进行fljA样基因表达。结论:成功获得能在大肠埃希菌中表达伤寒沙门菌fljA样基因的载体。

摘要：发展低温贮种是我国今后种子工作的必经之路。为了延长种子寿命,保持种子活力,做好良种贮备,避免种子积压和转商损失,我公司于1984年建设,一座低温低湿仓库,面积400平方米,可贮藏种子40万公斤。1989年正式投入使用,经两年试贮,效果良好,效益显著。现就低温贮种技术和效益简述如下: 一、低温低湿仓库设计 根据种子在低温摄氏15度以下和相对温度65％的条件下,处于微呼吸状态,一年内生活力不降低的原理,我公司参照外地经验,结合本地实际情况,设计了低温低湿仓库的参数标准。要求种子贮藏温度在10～15℃,相对温度65％,保存种子一年。因此,在建筑设计和保温材料的选择上,尽量简化。