摘要：目的　研究并比较正常ATP7B蛋白及其突变体蛋白的表达水平 ,为进一步探寻ATP7B蛋白参与铜转运的机制奠定基础。方法　构建含健康人全长Wilson病 (WD)cDNA片段的真核细胞表达质粒ATP7BcDNA/ pcDNA3,定点诱变三种具有代表意义的突变体表达质粒Arg778Leu/pcDNA3、Gln914Ter/ pcDNA3和Thr935Met/ pcDNA3;同时设计并制备包含ATP7B蛋白N端主要功能区的具有高度特异性和敏感性的ATP7Bn33 6 2 9抗体 ;分别以上述质粒瞬时转染中国仓鼠卵细胞 (Chinesehamsterovary ,CHO) ,收集细胞提取蛋白 ,以ATP7Bn33 6 2 9抗体为一抗 ,免疫印迹分析并比较正常和突变体ATP7B蛋白的表达程度。结果　ATP7B蛋白在正常ATP7BcDNA/pcDNA3表达质粒和Arg778Leu/ pcDNA3、Thr935Met/pcDNA3错义突变体表达质粒转染的CHO细胞中表达量一致 ,而在Gln914Ter/ pcDNA3截短突变体表达质粒转染的CHO细胞中表达量明显增加。结论　成功构建了WD突变体表达质粒并在转染细胞中表达 ,为进一步的功能研究打下基础。错义突变未改变ATP7B蛋白表达量 ,提示错义突变引起铜代谢障碍的机制与蛋白表达量无关。截短突变产生的ATP7B蛋白产物表达量增加可能与其所需的翻译时间相对较短有关。

摘要：目的研究我国多发性硬化（multiple sclerosis，MS）患者外周血单个核细胞基因SP3（specific protein3）mRNA表达缺失的特点及其与临床表型的关系。方法采集56例Ms患者外周血单个核细胞，提取总RNA，设计SP3特异性引物，采用逆转录PCR方法观察SP3基因mRNA表达情况，并与其他疾病组、健康对照组进行比较。结果56例MS患者中23例SP3为阴性结果，SP3表达缺失率为41．1％；健康对照组35例有5例为阴性结果，缺失率为8．6％；其它疾病对照组27例有4例为阴性结果，缺失率为14．3％。MS组与两对照组之间的差异有统计学意义（P〈0．01）。SP3表达缺失组与表达组急性期的改良残废程度量表评分差异无统计学意义，稳定期则差异有统计学意义（P〈0．05）。结论通过对MS患者SP3基因mRNA表达的研究，观察到中国人MS存在该基因mRNA表达缺失。SP3与MS临床表现及其免疫学发病机制之间可能存在一定的相关性。

摘要：目的研究我国肝豆状核变性(WD)患者MURR1基因的突变特征及其与WD患者临床表型的关系。方法根据MURR1基因全长3个外显子及其毗邻内含子序列,自行设计合成引物,聚合酶链反应(PCR)扩增61例经ATP7B基因诊断确诊的WD患者的MURR1基因序列,PCR产物纯化后直接测序检测MURR1基因突变和多态,并以60名健康人作为对照。结果1例患者在5’非翻译区检出较为罕见的-43T→C杂合新多态,因例数太少,无法分析基因型和临床表型的关系。27例患者检出2号内含子的IVS2+63C→C杂合多态,1例为纯合多态,频率为23．8％(29／122);60名健康对照中,26名检出此杂合多态,3名为纯合多态,频率为26．7％(32／120)。通过X2检验,IVS2 +63C→G在健康对照和WD患者中的频率基本相等(X2=0．269,P>0．1),表明这是一个群体多态。在MURR1基因编码区和剪接位置均未发现突变或多态。结论MURR1基因突变在我国WD患者中是罕见的,与我国WD患者的临床表型无相关性。