摘要：根据基因库中猪圆环病毒 (PCV)的基因序列设计引物 ,建立复合PCR方法 ,对 2株PK 15细胞进行了PCV检测。结果 2株PK 15细胞都可扩增出PCV 1的基因片段 ,其中 1株还扩增得到了PCV 2的DNA片段。由此可见 ,应用设计的引物进行复合PCR快速检测PCV是可行的 ,这为PCV的检测。

摘要：根据GenBank上发表的IBVS2基因序列 ,自行设计了两对引物 ,分别扩增SD/ 97/ 0 2株S2基因的上游110 0bp部分和下游的 90 0bp部分 ,两段序列拼接后包含了S2全基因的序列。将此两段分别克隆入pGEMT easy载体 ,测序后将序列用分析软件DNASTAR和网上的BLAST软件进行分析 ,结果表明 ,S2基因比S1基因相对来说更保守 ,位于氨基酸第 5 6 0～ 6 0 0位很可能是与囊膜锚着的部位 ,而S2与S1的交界处以HRRRR为特征 ,这不同于常规的RRF/SRR。

摘要：参考 Gen Bank上的传染性支气管炎病毒 (IBV)序列 ,自行设计合成了 3条引物 ,对 IBV青岛腺胃分离株 (SD/97/ 0 2 ) RNA进行 RT- PCR扩增 ,扩增含基质蛋白 (M)及 5 a、5 b蛋白基因的约 1.6 5 kb的片段 ,对 PCR产物进行克隆后测序。序列分析显示 ,M蛋白基因与其他 IBV相应的基因同源性在 90 .33%～ 92 .75 %之间 ,氨基酸序列比较 ,同源性在 89.82 %～ 94.2 5 %之间 ;5 a基因与其他 IBV的基因同源性在 84.34 %～ 87.37%之间 ,氨基酸同源性在 81%～82 %;5 b基因与其他 IBV的基因同源性在 91%～ 92 %之间 ,氨基酸同源性在 93%左右。

摘要：为探讨鸡传染性支气管炎病毒(IBV)作为载体表达外源基因的可行性,本研究根据IBV H120疫苗株的全基因组序列设计引物,采用RT-PCR方法分10个片段对其基因组进行扩增,并克隆至pMD19-T载体中;同时构建IBV基因组5a基因编码区被增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因替换的重组质粒。采用体外拼接策略,将BsaI酶切处理的10个基因片段顺序连接,构建5a基因编码区被EGFP基因替换的基因组全长cDNA,其5'端具有完整的T7 RNA聚合酶启动子核心序列,3'端具有polyA尾巴结构。然后通过T7 RNA聚合酶体外转录系统合成病毒基因组RNA,脂质体转染BHK-21细胞进行病毒拯救。结果表明成功的从基因组全长cDNA拯救出重组病毒H120-5a/EGFP株,其在鸡胚中能有效的复制和传代,并表达绿色荧光蛋白;5a基因的缺失并不影响病毒对鸡胚的致病性。本研究为进一步开展IBV的分子致病机理、载体疫苗等研究奠定了基础。

摘要：参考Genebank发表的传染性支气管炎病毒 (IBV)S1纤突蛋白基因序列 ,自行设计合成了 1对引物 ,对IBV青岛腺胃分离株 (SD/97/0 2 )RNA进行RT PCR扩增。产物经琼脂糖凝胶电泳分析 ,呈现 1条 16 5 7bp的条带 ,将其克隆入pMD18 T载体中 ,并进行序列测定 ,证实为S1基因。将此重组质粒命名为pMDQXS1。

摘要：参考Genbank上发表的IBVS1纤突蛋白基因序列 ,设计了一对引物 ,对鸡传染性支气管炎病毒青岛腺胃分离株 (SD/ 97/ 0 2 )RNA进行RT PCR扩增。将PCR产物克隆入pMD18 T载体中进行序列测定和分析。序列分析表明 ,该毒株的S1基因的G +C %含量较少 ,为 37.0 % ,存在HindIII,BamHI,BgIII,SacI和SalI位点 ,无EcoRI位点 ,与其他毒株的同源性在 87.0 2 % 94 .2 1%之间 ,在第 15 4～ 4 2 9nt处为高度的变异区 ;将基因序列翻译成氨基酸后 ,假定的S1蛋白由 5 4 0个氨基酸组成 ,等电点 8.2 4 ,在蛋白质内部存在 18个Cys,在S1与S2蛋白之间的剪切位点为HRRRR ,这与大多数IBV毒株 (RRF/SRR)不一样 ,有三个区域的氨基酸序列高度保守 ;16 9～ 181aa,2 30～ 2 5 0aa ,4 85～ 5 0 6aa ;与其他毒株进行抗原性比较后发现 ,在该毒株的 32 0～ 32 6aa及 390～ 4 0 1aa处的抗原表位消失 ,而在 32 5～345aa、379～ 389aa处则出现了很强的抗原表位 ;第 4 38～ 4 4 4aa处 ,其他IBV毒株 (除ZJ971株外 )原来存在的强抗原位点在本毒株中消失 ;在 5 3～ 6

摘要：根据鸡传染性支气管炎病毒(IBV)H120疫苗株的全基因组序列设计引物,采用RT-PCR方法对其基因组分10个片段进行扩增,并克隆至pMD19-T载体中进行测序。经BsaⅠ限制性内切酶酶切后,采用优化的连接策略将各DNA片段进行连接,获取H120株的基因组全长cDNA,其5′端具有完整的T7RNA聚合酶启动子的核心序列,3′端具有polyA尾巴结构。通过T7RNA聚合酶体外转录系统合成病毒基因组RNA,转染BHK-21细胞并进行病毒拯救。采用RT-PCR、测序及鸡胚传代对拯救出的病毒株进行鉴定。结果表明成功地从H120株的基因组全长cDNA拯救出病毒H120-R株,为进一步开展该病毒的分子致病机理研究、新型疫苗的研制等奠定了基础。

摘要：根据GenBank中猪圆环病毒 2型 (PCV 2 )基因序列 ,设计两对特异性引物 ,用PCR方法从接种疑似PMWS仔猪病料的细胞中分段扩增 2个分离毒株全基因组。将扩增片段克隆入 pGEM Teasy载体 ,筛选获得含有相应片段的阳性重组质粒。对质粒中的插入片段进行测序拼接 ,获得 2株均为 176 8bp的全基因组序列。应用DNAstar序列分析软件 ,对所测PCV 2序列与GenBank中的国内外PCV毒株进行同源性比较 ,并绘制系统发生树 ,结果发现 :所测两毒株之间的核苷酸序列同源性极高 ,可达 99 8% ,亲缘关系密切 ;与PCV 2参考毒株的同源性介于95 3%～ 99 7%之间 ,其中与美国的一株PCV 2同源性最高 ,分别为 99 5 %和 99 7% ,亲缘关系很近 ;与国内两分离株同源性分别为 96 4%和 98 8%～ 98 9% ;与PCV 1参考毒株同源性仅为 77 1%～ 77 5 %。

摘要：参考Genbank收录的IBV纤突蛋白 (S1)基因序列 ,自行设计合成一对引物 ,对传染性支气管炎病毒 (IBV)江苏省地方分离毒株 (JS/95/0 3)RNA进行RT PCR扩增 ,产物经琼脂糖凝胶电泳分析 ,呈现一条 1716bp的条带 ,将其克隆入T/A质粒pMD18 T载体中 ,转化大肠杆菌JM10 9,挑选阳性克隆 ,用质粒少量提取法提取重组质粒 ,用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切对重组克隆质粒进行鉴定 ,然后进行序列测定 ,证实为S1基因。将此重组质粒命名为pMDJS950 3S。