摘要：目的:将血管内皮生长因子应用于骨髓单个核细胞自体移植治疗肢体缺血,探索一种简单、安全有效治疗肢体缺血的方法,同时初步分析血管内皮生长因子促进血管新生的机制和疗效。方法:实验于2005-03/2006-07在上海交通大学附属第六人民医院动物实验中心完成。将48只雄性Wistar大鼠采用随机单位组设计分为4组:缺血对照组、血管内皮生长因子治疗组、骨髓单个核细胞治疗组、转染血管内皮生长因子基因的骨髓单个核细胞治疗组,每组12只。结扎所有动物左后肢股动脉及分支,制备后肢缺血模型。以微量加样器自结扎处以下2cm开始,间隔0.2cm为一注射点,共注射于内收肌和腓肠肌5点,每注射点各注射60μL,缺血对照组大鼠注射300μL培养液,血管内皮生长因子治疗组大鼠注射含5μg基因pcDNA3.1-hVEGF165的DNA-脂质体复合物,骨髓单个核细胞治疗组大鼠注射3×106个骨髓单个核细胞,转染血管内皮生长因子基因的骨髓单个核细胞治疗组大鼠注射含3×106个血管内皮生长因子的骨髓单个核细胞。于移植后4周行动脉造影,采用RT-PCR检测血管内皮生长因子基因的体内表达,采用免疫组化法检测缺血区新生血管密度,评价血管新生情况。结果:48只大鼠均造模成功,并进入结果分析。①移植后4周动脉造影显示,缺血对照组大鼠股动脉及其分支均未显影,血管内皮生长因子治疗组和骨髓单个核细胞治疗组可见中等量新生血管,两组效果相似,转染血管内皮生长因子基因的骨髓单个核细胞治疗组可见有大量新生血管新生,丰富的侧枝循环建立。②大鼠毛细血管密度测定结果显示,血管内皮生长因子治疗组和骨髓单个核细胞治疗组均较缺血对照组新生血管数量增加,转染血管内皮生长因子基因的骨髓单个核细胞治疗组可进一步增强疗效[(10.0±0.8),(21.7±1.9),(20.4±3.3),(42.1±3.5)个/HP,P0.05)。③RT-PCR检测大鼠血管内皮生长因子基因的体内表达,转染血管内皮生长因子基因的骨髓单个核细胞治疗组和血管内皮生长因子治疗组均有扩增,转染血管内皮生长因子基因的骨髓单个核细胞治疗组人血管内皮生长因子mRNA相对含量表达高于血管内皮生长因子治疗组(0.191±0.044,0.094±0.032,P<0.05)。结论:本组实验结果说明采用骨髓单个核细胞作为基因载体细胞治疗大鼠肢体缺血,能使血管内皮生长因子获得稳定有效的表达,其效果优于直接基因注射。

摘要：背景:已有实验表明,通过自体血管内皮细胞种植于人工血管腔面提高了血管移植的通畅率。骨髓内皮细胞衬里人工血管是否有利于人工血管体内的内皮化过程?目的:通过骨髓内皮细胞衬里人工血管间置移植的动物实验观察人工血管内皮化效果。设计:观察对比动物实验。单位:上海市第六人民医院。材料:实验于2000-09/2001-10在上海市第六人民医院完成。选用20只上海地区杂种犬,犬龄1.0～2.0岁,雌雄不拘,体质量(18.7±2.3)kg方法:分离犬骨髓单核细胞,ePTFE人工血管以2种规格(4 mm×4cm和8mm×5cm)完成内皮化。颈总动脉移植:选用10只实验犬切除颈总动脉主干4cm,将直径4mm长4cm的ePTFE人工血管间置移植于双侧颈总动脉,内皮化人工血管为实验组,未经内皮化人工血管为对照组,每组5只。术后2周及2个月采用彩色超声检查移植血管通畅率及血流速率。下腔静脉移植:选用剩余10只实验犬,6只为实验组,实验犬麻醉下将下腔静脉游离约8～10 cm,阻断两端,切除约5 cm,取直径8 mm长5 cm内皮化ePTFE人工血管,以5-0 Prolene作端端吻合,4只为对照组,以相同规格ePTFE人工血管为移植血管。术后2个月测定血管通畅率。同时与上述时间点计算各组移植血管内皮细胞覆盖率及内膜厚度。主要观察指标:①各组实验犬不同时间点移植血管通畅率及血流速率。②各组移植血管内皮细胞覆盖率及内膜厚度。结果:①颈总动脉移植术后2周和2月实验侧通畅率分别为100% (5/5)和60%(3/5).同期对照侧通畅率分别为40%(2/5)和0%(0/5)。术后2个月实验组平均血流速率明显小于对照组(P<0.05)。下腔静脉移植实验组和对照组2月移植血管通畅率为83%(5/6)和50%(2/4)。②颈总动脉及下腔静脉移植术后2周实验组血管腔面内皮细胞覆盖率大于对照组,差异有显著性意义(P<0 05),术后2个月实验组血管内膜厚度小于对照组,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:骨髓内皮细胞衬里的ePTFE人工血管在体内能较快完成内皮化过程,能抑制内膜增生;循环内皮细胞作为内皮细胞的潜在来源,具有一定临床应用价值。

摘要：肝移植是治疗急慢性肝功能衰竭最有效的方法，但是，由于供肝缺乏，必需寻求终未性肝病替代疗法。其中主要方法之一是体外生物人工肝支持系统，简称生物人工肝(***)，发展至今已有40多年。临床试验证明BAL能促进肝功能衰竭病人的恢复，或过渡到肝移植。生物反应器是BAL的核心部件，生物反应器设计的主要目的在于保持肝细胞活力和功能，且不妨碍肝细胞营养及代谢产物的交换，同时还能起到治疗作用。细胞材料是BAL治疗基础，维持细胞活率和功能对BAL功效有决定性作用。本文就生物人工肝装置在实验和临床试验中的研究进展作一综述。

摘要：目的采用普通型中空纤维及编织型中空纤维两种人工肝生物反应器,比较其内培养的肝细胞生存时间及功能,为生物反应器的设计提供新的方法和思路。方法将新生中国实验小型猪的肝细胞与微载体共同培养,待肝细胞与微载体充分粘附形成微载体-球形聚集体后,将其注入生物反应器的外腔,在培养液内加入氯化氨、醋胺酚检测生物反应器的生物转化和代谢功能,行无血清培养检测肝细胞白蛋白的合成功能,并检测肝细胞酶的漏出量。锥虫蓝染色测定肝细胞的活力,透射电镜观察其超微结构。结果肝细胞与微载体相互聚集,形成了具有一定结构层次的肝细胞聚集体,重构了肝细胞之间的相互连接;接种入生物反应器后,在编织型生物反应器中肝细胞1周内保持较高的活力,至第7天肝细胞活力仍高达(75±6.3)%,对醋氨酚和氯化铵有良好的代谢、生物转化功能,白蛋白合成在第7天为(0.57±0.13)mg/106个肝细胞,酶的漏出量也少,各项指标均明显优于普通型生物反应器组(P<0.05)。结论编织型生物反应器为肝细胞的生长、增殖提供一个类似体内的三维立体环境,是一种性能良好的生物反应器。