摘要：本研究通过在病毒性出血性败血症病毒(Viral Haemorrhagic Septicaemia Virus,VHSV)的保守区5’端设计一对保守引物,在上游和下游引物的5’端分别修饰生物素(biotin)和异硫氰酸荧光素(FITC),成功建立了VHSV快速、可视化核酸试纸条检测方法。该方法具有高灵敏度,能够检测到33拷贝/μL的VHSV,比凝胶成像检测方法提高了10倍的灵敏度。实验结果证实该方法操作程序简便、反应迅速且灵敏,具备良好的特异性,可满足现场一线对于VHSV快速检测的需求,为流行病学调查及预防控制提供了新的方法学基础。

摘要：目的:设计对比实验,以冷冻草莓为材料,研究样品中所含抑制剂对诺如病毒荧光定量逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测结果的影响,优化提高检测灵敏度与准确率。方法:GⅡ型诺如病毒便悬液的制备与RNA提取,已知阴性冷冻草莓样品进行前处理、病毒富集、病毒RNA提取纯化,分组(对照组、实验组),抑制剂去除,荧光定量RT-PCR检测。结果:随着病毒浓度的梯度递减,抑制剂影响作用呈明显增强趋势,导致在高于正常检测最低限度两个数量级的水平,即出现假阴性结果;抑制剂去除的实验组检测结果,随着病毒浓度梯度的递减明显优于未经处理的对照组;抑制剂去除的实验组稳定检出限为10-6(Ct值小于40),最低检出限为10-7(诺如病毒(norovirus,No V)浓度梯度检测最低检出限为10-5)。结论:抑制剂去除可明显优化冷冻草莓中No V荧光定量RT-PCR检测,提高检测方法的灵敏度,且操作简便快捷,检测成本浮动不大,期望应用于日常检测工作中。

摘要：为建立迟缓爱德华氏菌的快速检测方法,本研究根据迟缓爱德华氏菌溶血相关基因eha设计保守引物,建立迟缓爱德华氏菌快速、可视化核酸试纸条检测技术。试验结果显示,该技术快速、灵敏、具有良好的特异性,灵敏度可达到30CFU/mL,比琼脂糖凝胶成像检测技术灵敏度要高近10倍。迟缓爱德华氏菌可视化核酸试纸条检测方法的成功建立对水产养殖过程中迟缓爱德华氏菌病防治具有重要的意义。

摘要：依据对虾黄头病毒（Yellow head virus,YHV）的非结构蛋白N基因序列,设计特异的锁式探针（Padlock probe,PLP）、检测探针及引物,建立YHV超分支滚环扩增（Hyper-branched rolling circle amplification,HRCA）检测试纸。灵敏度实验显示,YHV HRCA检测试纸能检测出的最低模板量为101拷贝,是RT-PCR灵敏度的100倍。特异性实验结果表明,该试纸能够特异性地对YHV进行检测。利用该检测试纸对进出口80批次虾样本进行检测,并将检测结果与常规RT-PCR相比较,结果显示,YHV HRCA检测试纸灵敏度方面优于常规RT-PCR方法,且操作简便、结果直观易读。

摘要：目的利用依赖解旋酶DNA恒温扩增技术(HDA),建立一种快速检测志贺菌(Shigella)的新方法。方法根据志贺菌的ipaH基因序列设计特异性引物,优化反应体系和反应条件;并对方法进行特异性和灵敏度评价。结果对21株实验菌株检测,3株志贺菌均为阳性,其余18株非志贺菌均为阴性,灵敏度为5.1×103cfu/mL,与普通PCR方法检测结果相当。结论 HDA法检测志贺菌具有特异、灵敏及仪器要求低等特点,具有广阔的应用前景。

摘要：从患病大菱鲆(Scophthalmus maximus)中分离到菌株CW7,通过VITEK 2 Compact全自动微生物鉴定仪分析,初步鉴定为迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)。测定分离菌株CW7的16S rRNA基因序列并进行Blast比对,结果显示,该分离菌株与迟钝爱德华氏菌的同源性最高,达99%。根据迟钝爱德华氏菌的3个毒力基因——fimA,citC和gadB设计引物,进行PCR扩增,得到目的片段,与GenBank中报道的迟钝爱德华氏菌同源性达98%,97%和97%,说明分离菌株CW7有致病力。

摘要：为建立单核细胞增生李斯特氏菌(Lm)的依赖解旋酶DNA恒温扩增(HDA)检测方法,本研究以Lm的iap基因为目的片段设计特异性引物,建立了可在65℃恒温扩增快速(90 min)检测Lm的HDA检测方法,分别对反应体系中的MgAc2、Bst聚合酶、UvrD解旋酶、dNTPs以及引物等的浓度进行优化,进行了特异性和灵敏度试验,并与普通PCR方法进行了比较。结果表明,所建立起的检测法最低检测限为7.8×103 cfu/mL,灵敏度与普通PCR方法相当。Lm的HDA检测方法具有普通PCR的特异、灵敏等特点,并且对仪器要求更低,具有良好的应用前景。

摘要：采用自行建立和优化的依赖解旋酶DNA恒温扩增(HDA)检测体系,建立HDA检测方法对大肠埃希氏菌O157:H7进行检测。采用大肠埃希氏菌O157:H7的rfbE基因为目的片段设计特异性引物,建成可快速检测大肠埃希氏菌O157:H7的HDA检测法,进行了特异性和灵敏度试验,并与普通PCR方法进行了比较。结果表明:所建立起的检测法,灵敏度为4.3×103 cfu·mL-1,灵敏度与普通PCR方法相当。大肠埃希氏菌O157:H7的依赖解旋酶DNA恒温扩增检测方法具有普通PCR的特异、灵敏等特点,并且对仪器要求更低,用普通水浴槽即可进行反应。具有广阔的推广前景。

摘要：目的:基于依赖解旋酶DNA恒温扩增技术(Helicase-dependent Isothermal DNA Amplification,HDA),建立一种快速检测沙门菌(Salmonella)的新方法。方法:以沙门菌的invA基因为目的片段设计特异性引物,根据设计的HDA的扩增条件,进行沙门菌的快速检测,进行特异性和灵敏度实验,并与普通PCR方法进行比较。结果:成功建立起沙门菌HDA检测法,最低检测限为460 pg/tube,与普通PCR方法相当。结论:HDA法检测沙门菌具有快速、简便、特异、灵敏等特点,极适合基层实验室使用,具有广阔的应用前景。

摘要：旨在建立一种可同步检测猪10种常见疫病病毒,猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)、猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)、猪圆环病毒2型(porcine circovirus 2,PCV2)、猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)、猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus of swine,TGEV)、猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)、猪巨细胞病毒(porcine cytomegalovirus,PCMV)和口蹄疫病毒(food-and-mouth disease virus,FMDV)的基因芯片检测技术,为临床病料的初步诊断及流行病学调查提供一个新的可靠方法。对10种病毒基因的序列进行分析,设计引物对靶基因进行PCR扩增,将纯化后的靶基因点制成芯片,通过Cy3标记特异性引物扩增病毒得到具有荧光标记的探针,然后与芯片进行杂交,扫描分析结果,建立其基因芯片检测方法,并对该方法的特异性、敏感性和稳定性进行检测。应用建立的基因芯片检测方法和普通PCR/RT-PCR方法对1 006份样品进行符合检测。试验结果表明,基因芯片检测10种病毒特异性好、灵敏度高,最低检测限度可达10^(5 )copies·μL^(-1),检测中,基因芯片与普通PCR/RT-PCR对1 006份临床样品的检测符合率为96.79%以上。初步研究表明,该基因芯片技术可同时同步检测10种猪疫病病毒,可应用于临床病料的初步诊断。