摘要：背景:单独使用天然材料如胶原、明胶及纤维蛋白制备的支架虽然解决了生物相容性等问题,但由于其降解太快,在作为细胞支架时往往提前塌陷而达不到诱生新组织的目的。目的:探讨应用丝素与壳聚糖复合制作生物可降解三维多孔的支架,并对其特性进行检测。设计、时间及地点:材料学观察实验,于2008-06/2009-06在浙江省医学科学院生物工程研究所完成。材料:春蚕茧由浙江省海宁市马桥镇黄墩庙村蚕农赠送,壳聚糖为上海伯奥生物科技有限公司产品。方法:通过脱胶、溶解、透析这3个主要步骤制成质量浓度为15g/L的丝素溶液,将壳聚糖溶解在2%的醋酸溶液中制成25g/L的壳聚糖-乙酸溶液,然后将两者混合,配制成丝素/壳聚糖质量比分别为10:0,5:5,4:6,3:7,2:8,0:10的6种溶液,分别吸入24孔板中,4℃排出气泡后,-20℃预冷冻12h,再冷冻干燥30h。取出后梯度乙醇水化,再用NaOH-乙醇溶液中和稳定1h,漂洗后再次冻干。主要观察指标:光镜和扫描电镜观察各种质量比配制的支架孔径、结构;采用改良的液体替代法测定各种支架的孔隙率;测定各种支架在体外4周的降解率。结果:丝素/壳聚糖质量比为10:0制成的支架孔隙粗大,非常蓬松,易碎,溶失率太高;相反仅以壳聚糖制成的支架冻干后较硬,缺乏足够的弹性;以5:5,4:6,3:7,2:8制成的复合支架冻干后,支架较松软,类似海绵,随着壳聚糖浓度增加,支架硬度增加,支架上有分布均匀且细密的小孔。光镜下各个孔形态不规则,每个孔紧密相连并联通,孔径大小均匀,孔径20～100μm,随着壳聚糖浓度增加,孔径逐渐减小。支架孔隙率测定结果显示,丝素/壳聚糖质量比为4:6组>5:5组>3:7组>2:8组,与丝素/壳聚糖质量比为2:8组比较,5:5组和4:6组的支架孔隙率均明显增大(P0.05)。第4周时丝素/壳聚糖质量比为2:8组降解最慢,5:5组降解最快。结论:在理化性能方面,将丝素与壳聚糖混合制作的复合支架较单纯用丝素或壳聚糖制作的支架均显示出明显优势,其中用丝素/壳聚糖质量比为5:5及4:6制成的复合支架最符合软骨组织工程的需要。

摘要：背景:抗突变剂能有效阻止化学致癌物对遗传物质的损害,因此,积极寻找具有抗突变作用的生物资源具有重要的意义。目的:系统评价壳聚糖纳米混悬剂对多种强阳性诱变剂的抗突变效应。设计、时间及地点:体外对照观察试验,于2007-03/2008-03在浙江省医学科学院生物工程研究所完成。材料:自制壳聚糖纳米混悬剂(平均粒径25.3nm,占总粒子数99.1%),8种诱变剂均购自美国Sigma公司。方法:用鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验(Ames试验),将壳聚糖纳米混悬剂设定为高、中、低(2500,1250,625μg/皿)3个剂量组,分别对NaN3、MMC、9-AA、2,7-AF、NQNO、Dexon、CP、2-AF等8种常用诱变剂进行抗突变作用观察。主要观察指标:根据平均回变菌落数计算抑制率,用抑制率判断其抗突变作用程度。结果:高、中剂量组壳聚糖纳米混悬剂对NaN3、MMC、9-AA、2,7-AF、NQNO、CP和2-AF分别呈中度抑制和弱抑制,低剂量组无抑制作用。壳聚糖纳米混悬剂对诱变剂Dexon显示出较强的抗突变效应,3个剂量组对Dexon诱发的回变菌落数均显著下降(P<0.01)。随着壳聚糖纳米混悬剂浓度的增加,对不同致突变剂产生的诱发回变菌落数明显下降,抑制率上升,呈现量效关系。结论:壳聚糖纳米混悬剂对多种诱变剂具有不同程度抗突变效应,并呈现量效关系。

摘要：目的:明确骨髓间充质干细胞移植到关节软骨损伤处后,该处修复组织的细胞来源,以了解组织修复的过程。方法:实验于2006-01/2007-01在浙江省医学科学院生物工程所完成。①实验材料:3月龄新西兰大白兔,清洁级,体质量约2kg,由浙江省实验动物中心提供。②实验方法:利用兔性别决定基因序列设计两对PCR引物。取雄性新西兰大白兔进行骨髓间充质干细胞的分离培养与扩增。取雌性新西兰大白兔,暴露其膝关节软骨,用电钻钻孔造成膝关节软骨内侧直径4.5mm深3.5mm的全层关节软骨缺损,达软骨下骨。一侧植入骨髓间充质干细胞/胶原海绵,另一侧仅植入胶原海绵。③实验评估:于术后1,2,3,4,5个月取兔关节软骨缺损修复处组织提取总DNA,进行PCR扩增,鉴定移植物中是否存在性别决定基因,以明确细胞来源。结果:移植后1,2,3,4,5个月移植雄兔骨髓间充质干细胞及胶原海绵的关节修复处组织提取的DNA,用设计的引物通过PCR扩增出一条约200bp大小的条带,大小与阳性对照一致;而另一侧仅移植胶原海绵的关节软骨修复处组织提取的DNA,用设计的引物通过PCR扩增后未发现有条带。PCR扩增阳性样本测序分析显示,每个样本碱基序列一致,与GenBank上性别决定区Y基因组gb|AY785433.1|比较,扩增的样本序列与标准序列完全一致,序列同源性达100%。结论:雌兔关节骨髓间充质干细胞/胶原海绵复合物移植处的新生组织中含有雄性组织,提示新生软骨中有移植的雄性骨髓间充质干细胞分化来的软骨细胞。

摘要：目的:建立一种特异、相对简便的H IV流行毒株基因分型新技术。方法:从H IV-1抗体阳性标本中提取H IV前病毒DNA,使用H IV-1型共用引物进行PCR扩增。同时设计一条型特异性的探针,然后通过制作DNA m acroarray芯片,鉴别样本的H IV亚型。结果:DNA m acroarray分析可以检测我国H IV主要流行株基因型的特异性序列:B、C、CRF01-AE和CRF07-BC。结论:DNA m acroarray方法对H IV亚型进行分析是可行的,可以在H IV流行病学调查中应用。