摘要：目的构建稳定的登革病毒4型Ban18HK20株感染性克隆,为深入研究登革病毒毒力位点及嵌合疫苗研发提供参考。方法根据登革病毒4型Ban18HK20株基因组序列设计特异引物,将病毒全长cDNA分6段进行亚克隆构建,再将其逐一拼接连入高拷贝质粒pSPTM中,获得稳定的病毒全长cDNA克隆,以其为模板体外转录RNA,并将RNA电转染Vero细胞,获得恢复病毒。通过蚀斑法、间接免疫荧光法、生长动力学试验、小鼠脑内致病力研究对恢复病毒的生物学特性进行鉴定,并利用RT-PCR扩增对传代病毒进行遗传稳定性研究。结果酶切及测序表明感染性克隆构建成功。获得的恢复病毒在蚀斑形态、病毒E蛋白表达、生长特征及小鼠脑内致病力等生物学特性方面同母本株一致,测序表明恢复病毒基因组序列与母本病毒相同,且遗传稳定。结论构建获得了稳定的Ban18HK20感染性克隆,建立了用于登革病毒研究的反向遗传学技术平台。